(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210997910.6 (22)申请日 2022.08.19 (71)申请人 辽宁中医药大学 地址 110847 辽宁省沈阳市皇姑区崇山 东 路79号 (72)发明人 孟宪生　罗曦　包永睿　王帅　 李天娇　孟莹　 (74)专利代理 机构 沈阳亚泰专利商标代理有限 公司 21107 专利代理师 史力伏 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/14(2006.01) G01N 30/30(2006.01)G01N 30/32(2006.01) G01N 30/34(2006.01) G01N 30/72(2006.01) G01N 30/74(2006.01) G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 枳壳药材的质量双标可视化质量控制技 术 (57)摘要 本发明公开了枳 壳药材的质 ‑量双标可视化 质量控制技术， 属于中药质量控制技术领域。 采 用HPLC技术 建立枳壳对照药材的特征图谱， 将其 与供试药材图谱进行比对来辨别药材的真伪， 即 “质”； 采用内标物质对 特征峰化学成分进行相对 定量来区分药材的优劣， 即 “量”； 利用Visual   Basic编程语言设计使质 ‑量双标控制方法可视 化。 建立的枳壳药材质 ‑量分析方法符合方法学 考察要求， 除湖北孝感枳壳样品以外， 其余样品 与对照药材的相似度均大于0.98； 规定了枳壳药 材特征峰化学成分相对含量下限。 该方法利用度 高、 重复性好， 能够完善中药材质量控制体系， 减 轻企业质检部门的经济负担， 以期推动中医药事 业可持续发展。 权利要求书2页 说明书5页 附图3页 CN 115326974 A 2022.11.11 CN 115326974 A 1.一种枳壳药 材质量控制标准的建立方法， 其特 征在于， 所述方法包括以下步骤： 步骤1 基于对照药 材的枳壳药 材定性研究； 步骤2 基于内标物质的特 征峰化学成分相对定量研究； 步骤3 方法学考 察。 2.根据权利要求1所述的一种枳壳药材质量控制标准的建立方法， 其特征在于所述步 骤1的具体步骤 包括： （1） 溶液的制备： 取枳壳对照药材及供试药材粉末， 精密称定， 置具塞锥形瓶中， 精密加 入50倍量的50%甲醇， 称定重量， 加热回流1  h， 放冷， 补足失重， 摇匀， 滤过； 续滤液挥干， 50% 甲醇定容， 摇匀， 过0.2 2 μm滤膜， 即得； （2） 色谱条件与系统适用性试验： 采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的Agilent  EC‑ C18色谱柱， 色谱柱规格为3.0 ×100 mm， 2.7‑Micron； 以0.1%甲酸水为流动相A， 以乙腈为流 动相B， 进行梯度洗脱； 流速1.0  mL/min； 柱温30℃； DAD检测器在波长330  nm下进行检测； 进 样量5 μL； （3） 特征图谱的建立： 每份样品平行2次， 按色谱条件依次进样检测， 将330  nm波长下的 图谱数据由分析检测仪器中导出获得10批供试药材的HPLC叠加图谱； 10批供试药材使用中 位数进行自动匹配， 加以多点校正， 生成共有模式R， 与对照药 材特征图谱进行比对； （4） 相似度评价： 以特征峰的相似度明确枳壳药材真伪； 除湖北孝感枳壳样品以外， 其 余样品与对照药 材的相似度均大于 0.98； （5） 特征峰化学成分解析： 采用Q ‑TOF‑MS技术， 通过分析化合物的保留时间、 一级离子 质荷比以及二级离 子碎片信息， 并与相关文献报道信息进行匹配， 鉴定出9个化学成分； （6） 中药材 （饮片） 可视化的质 ‑量双标质量控制方法程序： 利用Visual  Basic编程语言 设计包含1个 OEL控件和4个Command控件的适用于枳壳药材 （饮片） 可视化的质 ‑量双标质量 控制程序。 3.根据权利 要求2所述的方法， 其特征在于， 所述 （5） 中鉴定出9个化学成分分别为： 3号 峰为圣草次苷， 4号峰为新北美圣草苷， 6号峰为芸香柚皮苷， 7号峰为柚皮苷， 9号峰为橙皮 苷， 10号峰为 新橙皮苷， 12号峰为枸橘苷， 15号峰为川陈皮素， 16号峰为橘皮素。 4.根据权利要求1所述的一种枳壳药材质量控制标准的建立方法， 其特征在于， 所述步 骤2的具体步骤 包括： 以步骤1中确定的7号峰 “柚皮苷”作为内标物质， 通过内标物质化学成分准确定量， 计 算除湖北孝感枳壳外， 其余9批供试药材特征峰化学成分的相对含量， 取 “中位数‑标准差” 作为特征峰化学成分相对于内标物质化学成分的相对 含量下限。 5.根据权利要求1一种枳壳药材质量控制方法， 其特征在于， 所述步骤2 的特征峰均为 枳壳发挥其功效及药理作用的特 征活性化学成分。 6.根据权利要求1所述的一种枳壳药材质量控制标准的建立方法， 其特征在于， 所述步 骤3的具体步骤 包括： （1） 精密度实验： 精密吸取同一供试品溶液， 按色谱条件测定， 连续进样6次， 测定各色 谱峰相对保留时间、 相对 峰面积， 计算相对标准偏差； 各色谱峰相对保留时间、 相对 峰面积 RSD值均小于1.0%， 表明仪器精密度良好； （2） 稳定性试验： 精密吸取同一供试品溶液， 按色谱条件， 分别在0、 2、 4、 8、 12、 24  h进样权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115326974 A 26次检测， 测定各色谱峰相对保留时间、 相对峰面积， 计算相对标准偏差； 各色谱峰相对保留 时间、 相对峰面积RS D值均小于2.4  %， 表明供 试品溶液在24 h内稳定； （3） 重复性实验： 按供试品溶液制备方法制备6份供试样品， 按色谱条件， 分别进样检 测， 测定各色谱峰相对保留时间、 相对峰面积， 计算相对标准偏 差； 各色谱峰相对保留时间、 相对峰面积RS D值均小于1.9  %， 表明方法重复性良好； （4） 线性关系考察： 配制 “柚皮苷”的6个质量浓度溶液， 按 “2.1.2”项下色谱条件， 分别 进样检测， 以质量 （X） 为横坐标， 峰面积 （Y） 为纵坐标， 绘制标准曲线并进行线性回归， 得到 线性回归方程 （Y=1327.2X+87.58） 、 相关系数 （r=0.999  1） ； 结果表明 “柚皮苷”在0.6800   ‑   5.7800 μg范围内线性关系良好。 7.根据权利要求1所述的一种枳壳药材质量控制方法， 其特征在于， 所述方法通过枳壳 药材特征图谱中的特 征峰作为枳壳药 材的定性标准， 能够明确鉴定药 材的真伪。 8.根据权利要求1所述的一种枳壳药材质量控制方法， 其特征在于， 所述方法通过建立 的特征峰相对 含量的计算方法确定的各 特征峰相对 含量的下限， 能够区分枳壳的优劣。 9.根据权利要求1所述的一种枳壳药材质量控制方法， 其特征在于， 所述方法通过 Visual Basic编程语言 设计的可视化的质 ‑量双标质量控制程序适用于枳壳药 材 （饮片） 。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115326974 A 3