(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210892889.3 (22)申请日 2022.07.27 (71)申请人 青岛农业大 学 地址 266109 山东省青岛市城阳区长城路 700号 申请人 山东省饲料兽药质量检验中心 (72)发明人 邹明　魏秀丽　张志民　刘华阳　 李有志　战余铭　陈志强　 (74)专利代理 机构 济南圣达知识产权代理有限 公司 372 21 专利代理师 张晓鹏 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/64(2006.01) (54)发明名称 桑仁清肺口服液中活性成分的同时测定方 法 (57)摘要 本发明公开了一种桑仁清肺口服液中活性 成分的同时测定方法， 包括如下步骤： 采用萃取 剂对桑仁清肺口服液样品进行超声萃取， 离心、 过滤， 得提取液； 采用超高效液相色谱法对甘草 苷、 甘草酸、 白花前胡甲素、 黄芩苷、 黄芩 素、 汉黄 芩素、 连翘苷、 连翘酯苷和橙皮苷同时进行检测； 色谱柱为HSS  T3色谱柱； 流动相A为 乙腈+0.2％ 磷酸， 流动相B为0.2％磷酸， 并对梯度洗脱程序 进行了摸索。 方法简便快速、 分离效果好， 测定精 度高， 结果重现性好， 易于观察， 专属性强， 色谱 峰峰形良好， 既达到中国兽药典的要求， 又节省 时间、 试剂。 权利要求书1页 说明书18页 附图11页 CN 115144507 A 2022.10.04 CN 115144507 A 1.一种桑仁清肺口服液中活性成分的同时测定方法， 其特征在于： 包括如下步骤： 采用 萃取剂对桑仁清肺口服液样品进行超声萃取， 离心、 过滤， 得提取液； 采用超高效液相色谱 法对甘草苷、 甘草酸、 白花前胡甲素、 黄芩苷、 黄芩素、 汉黄芩素、 连翘苷、 连翘酯苷和橙皮苷 同时进行检测； 色谱柱为HS S T3色谱柱； 流动相A为乙腈+0.2％磷酸， 流动相B为0.2％磷酸； 梯度洗脱程序为： 0 ‑2min， A的体积分数维持在10％； 2 ‑3min， A的体积分数由10％变为 12％； 3‑9min， A的体积分数维持在12％； 9 ‑12min， A的体积分数由12％变为2 0％； 12‑20min， A的体积分数 维持在20％； 2 0‑26min， A的体积分数由20％变为30％； 26 ‑30min， A的体积分数 维持在30％； 30 ‑33min， A的体积分数由30％变为38％； 33 ‑36min， A的体积分数维持在38％； 36‑38min， A的体积分数由38％变为45％； 38 ‑42min， A的体积分数由45％变为65％； 42 ‑ 44min， A的体积分数维持在65％； 44 ‑45min， A的体积分数由65％变为10％； 45 ‑48min， A的体 积分数维持在10％。 2.根据权利要求1所述的桑仁清肺口服液中活性成分的同时测定方法， 其特征在于： 超 高效液相色谱的检测波长为2 25‑229nm。 3.根据权利要求1所述的桑仁清肺口服液中活性成分的同时测定方法， 其特征在于： 所 述萃取剂为无 水乙醇或甲醇。 4.根据权利要求3所述的桑仁清肺口服液中活性成分的同时测定方法， 其特征在于： 桑 仁清肺口服液样品与萃取剂的体积比为1:1 ‑4。 5.根据权利要求3所述的桑仁清肺口服液中活性成分的同时测定方法， 其特征在于： 超 声萃取的时间为20 ‑30min。 6.根据权利要求5所述的桑仁清肺口服液中活性成分的同时测定方法， 其特征在于： 超 声功率为35‑45KHz。 7.根据权利要求1所述的桑仁清肺口服液中活性成分的同时测定方法， 其特征在于： 所 述离心的转速为80 00‑15000rpm/min， 离心时间为3 ‑18min。 8.根据权利要求7所述的桑仁清肺口服液中活性成分的同时测定方法， 其特征在于： 离 心的转速为10 000rpm/min， 离心时间为8 ‑13min。 9.根据权利要求1所述的桑仁清肺口服液中活性成分的同时测定方法， 其特征在于： 超 高效液相色谱的检测器为光电二极管阵列检测器， 柱温为30 ‑40℃， 流动相的流速为 0.36ml/min， 进样量 为0.5‑5 μL。 10.根据权利要求9所述的桑仁清肺口服液中活性成分的同时测定方法， 其特征在于： 进样量为1‑2 μL。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115144507 A 2桑仁清肺口服液中活性成分的同时测定方 法 技术领域 [0001]本发明涉及 一种桑仁清肺口服液中活性成分的同时测定方法， 属于兽药 中有效成 分检测领域。 背景技术 [0002]这里的陈述仅提供与本发明相关的背景技术， 而不必然地构成现有技术。 桑仁清 肺口服液为中兽药成方制剂， 收载于 《兽药国家标准(2017年版)中药卷》 p233 ‑234， 处方为： 桑白皮100 g， 知母80 g， 苦杏仁80 g， 前胡100 g， 石膏120 g， 连翘120 g， 枇杷叶60 g， 海浮石40 g， 甘草60g， 橘红100g， 黄芩140g； 以上11味， 加水煎煮2次， 合并煎液， 滤过， 滤液减压浓缩至相 对密度为1.02， 冷藏24小时， 滤过， 滤液加苯甲酸适量， 加水至1000mL， 搅匀， 分装， 灭菌即 得， 为棕黄色至棕褐色的液体。 具有清肺止咳平喘的功效， 主治肺热咳喘。 广泛应用于集约 化养禽企业。 [0003]桑仁清肺口服液质量标准中有11味药， 主要对甘草(甘草酸铵)、 黄芩(黄芩苷)、 连 翘(连翘苷)、 前胡(白花前胡甲素)进行薄层色谱鉴别， 对黄 芩进行含量测定 。 [0004]国家标准方法的薄层色谱检测方法中， 斑点受环境温湿度和人为操作的影响大， 斑点常常不清晰， 结果不易判定， 而且 费时、 费试剂， 在实际检验工作中发现层析用的展开 剂毒性大， 例如： 石油醚， 乙酸乙酯， 丁酮， 甲醇， 三氯甲烷等， 对实验人员的伤害比较大。 而 且操作繁琐， 用时较多。 [0005]另外， 桑仁清肺口服液的薄层色谱检测前期准备复杂， 需要展开， 晾干， 检视查看 结果等多个步骤， 费时费力， 而且受环境温湿度等因素的干扰比较大， 边缘效应等， 薄层斑 点有时方法难以判别， 重现性差 。 发明内容 [0006]针对现有技术存在的不足， 本发明的目的是提供一种桑仁清肺口服液中有效成分 的同时测定方法。 [0007]为了实现上述目的， 本发明是通过如下的技 术方案来实现： [0008]一种桑仁清肺口服液中有效成分的同时测定方法， 包括如下步骤： 采用萃取剂对 桑仁清肺口服液样品进行超声萃取， 离心、 过滤， 得提取液； 采用超高效液相色谱法对甘草 苷、 甘草酸、 白花前胡甲素、 黄芩苷、 黄芩素、 汉黄芩素、 连翘苷、 连翘酯苷和橙皮苷同时进 行 检测； [0009]超高效液相色谱的检测波长为205nm、 229nm、 252nm、 277nm和348nm； 色谱柱为HSS   T3色谱柱； 流动相A为乙腈+0.2％磷酸， 流动相B为0.2％磷酸； [0010]梯度洗脱程序为： 0 ‑2min， A的体积分数维持在10％； 2 ‑3min， A的体积分数由10％ 变为12％； 3 ‑9min， A的体积分数维持在12％； 9 ‑12min， A的体积分数由12％变为20％； 12 ‑ 20min， A的体积分数维持在2 0％； 20‑26min， A的体积分数由2 0％变为30％； 2 6‑30min， A的体 积分数维持在30％； 30 ‑33min， A的体积分数由30％变为38％； 33 ‑36min， A的体积分数维持说　明　书 1/18 页 3 CN 115144507 A 3