(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210922300.X (22)申请日 2022.08.02 (71)申请人 郑州深蓝海生物医药 科技有限公司 地址 450000 河南省郑州市航空港经济综 合实验区黄海路与生物科技二街交叉 口东北角郑州临 空生物医药园10号楼 (72)发明人 张慧英　 (74)专利代理 机构 北京知迪知识产权代理有限 公司 11628 专利代理师 王胜利 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/54(2006.01) G01N 30/74(2006.01) (54)发明名称 油溶性软膏中依地 酸盐的含量测定方法 (57)摘要 本发明公开了油溶性软膏中依地酸盐的含 量测定方法， 涉及药物分析技术领域， 以解决将 高效液相色谱法用于检测油溶性软膏中的依地 酸盐时可行性差的问题。 本发明提供的油溶性软 膏中依地酸盐的含量测定方法， 通过选择合适的 有机溶剂、 第二稀释剂及提纯次数， 可 以将油溶 性软膏中的依地酸盐与油脂性基质及其它辅料 有效分离。 通过对每一次离心分离后的水相中的 依地酸盐进行检测， 保证了对依地酸盐检测的准 确度。 本发明的液相色谱检测方法， 能够简单、 准 确地检测油溶性软膏中依地酸盐的含量， 具有准 确度高、 重复性 好的特点。 权利要求书2页 说明书11页 附图1页 CN 115290783 A 2022.11.04 CN 115290783 A 1.油溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法， 其特征在于， 采用高效液相色谱法检测， 包 括： 供试品溶液的制备： S1、 提纯： 取一定量的油溶性软膏； 加入有机溶剂、 第二稀释剂， 水浴加热一段时间后取 出， 涡旋混合、 离心， 离心后的溶 液静置分层， 得到提纯后的水相和有机相； S2、 取最后一次提纯后的水相， 加入第一稀释剂， 并用第二稀释剂定容， 定容后的溶液 静置衍生， 过滤， 采用液相色谱法检测水相中依地酸盐是否低于限值， 如果是， 确认提纯次 数N， 并转 步骤S4， 否则转 步骤S3； S3、 对所述有机相进行提纯， 包括： 取所述有机相， 向其中加入有机溶剂、 第二稀释剂 后， 再次水浴加热、 涡旋混合、 离心、 静置分层， 得 再次提纯后的水相和有机相， 重复步骤S2； S4、 重新取步骤S1中一定量的油溶性软膏， 按照确认的提纯次数N， 重复步骤S1对油溶 性软膏进行第一次提纯， 得到第一次提纯后的水相和有机相， 再重复N ‑1(N≥2)次步骤S3， 对每次提纯后的有机相 进行再次提纯， 得到N ‑1(N≥2)次提纯后的水相， 将所有N次提纯后 的水相合并， 加入第一稀释剂， 并用第二稀释剂 定容； 定容后的溶液静置衍生， 过滤， 即得供 试品溶液； 对所述供 试品溶液进行液相色谱法检测， 获得 供试品溶液中依地 酸盐的含量； 其中， 所述有机溶剂为 正庚烷、 正己烷中的一种或两种。 2.根据权利要求1所述的油溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法， 其特征在于， 所述液 相色谱法的检测条件如下： 色谱柱： 以C18、 C8烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂； 流动相： 以乙腈 ‑四丁基氢 氧化铵水 溶液为流动相A， 以乙腈或甲醇为 流动相B； 洗脱程序： 0min～18min， 流动相A、 流动相B的体积比为80： 20～100： 0； 18min～20min， 流动相A、 流动相B的体积比匀速渐变至34： 66～45： 55； 20min～30min， 流动相A、 流动相B的 体积比为34： 66～45： 55； 30min～31min， 流动相A、 流动相B的体积比匀速渐变至初始0min时 流动相A、 流动相B的体积比； 流速： 0.8mL/mi n～1.2mL/mi n； 柱温： 25℃～3 5℃； 检测波长： 25 0nm～258nm； 进样量： 10 μL～5 0 μL。 3.根据权利要求1所述的油溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法， 其特征在于， 所述步 骤S1中有机溶剂的加入量为每克油溶性软膏中加 5mL～20mL有机溶剂； 所述步骤S3中有机 溶剂的加入量 为所述有机相的1～1.5倍。 4.根据权利要求1或2所述的油 溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法， 其特征在于， 所 述第一稀释剂为铁盐、 铜盐中的一种或两种的水溶液， 所述第一稀释剂的浓度为0.1mg/mL ～1.0mg/mL， 所述步骤S2中第一稀释剂的加 入量为最后一次提纯后的水相体积的1/5～1/ 3， 所述步骤S4中第一稀释剂的加入量 为将所有提纯后的水相合并后的体积的1/ 5～1/3； 和/或， 所述第 二稀释剂为硫酸钠、 氯化钠、 硫酸钾或氯化钾中的一种或几种的水溶液； 所述第二稀释剂的浓度为5mg/mL～80mg/mL， 所述步骤S1、 S3中第二稀释剂的加入量分别为 所述步骤S1、 S3中有机溶剂加入量的1～1.5倍。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115290783 A 25.根据权利要求1～4任一所述的油溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法， 其特征在 于， 采用液相色谱法检测最后一次提纯后的水相中的依地 酸盐是否低于限值， 包括： 采用液相色谱法检测最后一次提纯后的水相中的依地 酸盐是否低于 0.02 μg/mL。 6.根据权利要求1～5任一所述的油溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法， 其特征在 于， 所述水浴加热的温度均为53℃ ～72℃， 水浴加热时间均为3min～8min； 和/或， 所述涡旋 混合均为水浴加热 取出后立即涡旋混合。 7.根据权利要求1～6任一所述的油溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法， 其特征在 于， 所述步骤S2中的定容为依据最后一次提纯后的水相的体积选择合适的定容量； 所述步 骤S4中的定容 为依据合并后水相的体积选择合 适的定容 量。 8.根据权利要求1～7任一所述的油溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法， 其特征在 于， 所述离心的离心转速均为3 000rpm～80 00rpm， 离心时间均为3mi n～5min。 9.根据权利要求1～8任一所述的油溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法， 其特征在 于， 所述过 滤为用0.2 2 μm～0.45 μm的水系膜过 滤。 10.根据权利要求2～9任一所述的油溶性软膏中依地酸盐的含量测定方法， 其特征在 于， 流动相A中， 所述的四丁基氢氧化铵水溶液的摩尔浓度为2mmol/L～8mmol/L、 pH值为2.0 ～5.0， 所述四丁基氢 氧化铵水 溶液与所述乙腈的比例为(70～ 90)： (30～10)。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115290783 A 3