(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210866413.2 (22)申请日 2022.07.22 (71)申请人 北京豪思生物科技股份有限公司 地址 102200 北京市昌平区回龙观镇科 学 园路7号院1号楼1层102-2 申请人 江苏豪思睦可生物科技有限公司 　 湖南豪思生物科技有限公司 (72)发明人 栗琳　李小侠　张新星　吴政晖　 应洪波　王倩倩　秦于杰　周立　 丁亮　 (74)专利代理 机构 北京超凡宏宇专利代理事务 所(特殊普通 合伙) 11463 专利代理师 张金铭 (51)Int.Cl. G01N 30/06(2006.01)G01N 30/02(2006.01) (54)发明名称 用于检测血清中25-羟基维生素D的试剂盒 及其应用 (57)摘要 本发明提供了一种用于检测血清中25 ‑羟基 维生素D的试剂盒及其应用， 涉及维生素D检测技 术领域。 该试剂盒用于采用高效液相色谱法检测 血清中25‑羟基维生素D2和2 5‑羟基维生素D3， 以 含有牛血清蛋白的缓冲液作为校准品的稀释液， 还含有用于对样品进行前处理的沉淀剂和样本 萃取液， 并且以样本萃取液中的月桂基苯甲酮作 为内标， 能够满足相关法规对试剂盒的线性、 重 复性、 批间差、 准确度、 稳定性等的要求， 对监测 人体维生素D有重要作用。 权利要求书2页 说明书31页 附图2页 CN 115236253 A 2022.10.25 CN 115236253 A 1.用于检测血清中25 ‑羟基维生素D的试剂盒， 其特征在于， 所述25 ‑羟基维生素D包括 25‑羟基维生素D2和25 ‑羟基维生素D3； 所述试剂盒包括用于高效液相色谱分析的校准品， 所述校准品为含有25 ‑羟基维生素 D2和25‑羟基维生素D 3的混合液； 用于稀释校准品的稀释液； 和用于对样品进 行前处理的沉 淀剂和样本萃取 液； 所述稀释液为含有牛 血清蛋白的缓冲液； 所述沉淀剂为硫酸盐或硝酸盐的水 溶液； 所述样本萃取 液为含有月桂基苯甲酮的有机溶 液。 2.根据权利要求1所述的试剂盒， 其特征在于， 所述稀释液为含有牛血清蛋白的PBS缓 冲液。 3.根据权利要求2所述的试剂盒， 其特征在于， 按照质量百分比计， 所述稀释液为含有1 ～5％牛血清蛋白的PBS缓冲液； 优选地， 所述稀释液为含有1％牛 血清蛋白的PBS缓冲液。 4.根据权利要求1所述的试剂 盒， 其特征在于， 所述沉淀剂为硫酸锌的水溶液或硝酸银 的水溶液； 优选地， 所述 沉淀剂为浓度为0.01～0.2mo l/L的硫酸锌水 溶液； 优选地， 所述 沉淀剂为浓度为0.2mo l/L的硫酸锌水 溶液。 5.根据权利要求1所述的试剂 盒， 其特征在于， 所述样本萃取液的溶剂为乙酸乙酯 或正 己烷； 优选地， 所述样本萃取 液为浓度为80 0～1200ng/mL月桂基苯甲酮的乙酸乙酯溶 液； 优选地， 所述样本萃取 液为浓度为10 00ng/mL月桂基苯甲酮的乙酸乙酯溶 液。 6.根据权利 要求1所述的试剂盒， 其特征在于， 所述校准品包括校准品S1、 校准品S2、 校 准品S3、 校准品S4、 校准品S5和校准品S6； 各校准品按照目标浓度配制， 然后经高一级校准 品赋值得到校准品的标示浓度； 校准品S1～S6中25 ‑羟基维生素D2和25 ‑羟基维生素D3的目 标浓度依次为70、 10 0、 200、 500、 800和1000ng/mL。 7.根据权利要求1所述的试剂盒， 其特 征在于， 所述试剂盒还 包括质控品。 8.根据权利要求7所述的试剂 盒， 其特征在于， 所述质控 品包括低 值质控品和高值质控 品； 各质控品按照目标浓度配制， 然后经高一级校准品赋值得到质控品的标示浓度； 低值质 控品和高值质控品中25 ‑羟基维生素D2和25 ‑羟基维生素D3的目标浓度依次为200和800ng/ mL。 9.根据权利要求1 ‑8任一项所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括校准品S1～ S6， 低值质控品、 高值质控品、 稀释液、 沉淀剂和样本萃取 液； 校准品S1中25 ‑羟基维生素D2和25 ‑羟基维生素D3的目标浓度为70ng/mL， 以甲醇作为 溶剂； 校准品S2中25 ‑羟基维生素D2和25 ‑羟基维生素D3的目标浓度为100ng/mL， 以甲醇作为 溶剂； 校准品S3中25 ‑羟基维生素D2和25 ‑羟基维生素D3的目标浓度为200ng/mL， 以甲醇作为 溶剂； 校准品S4中25 ‑羟基维生素D2和25 ‑羟基维生素D3的目标浓度为500ng/mL， 以甲醇作为权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115236253 A 2溶剂； 校准品S5中25 ‑羟基维生素D2和25 ‑羟基维生素D3的目标浓度为800ng/mL， 以甲醇作为 溶剂； 校准品S6中25 ‑羟基维生素D2和25 ‑羟基维生素D3的目标浓度为1000ng/mL， 以甲醇作 为溶剂； 低值质控品中25 ‑羟基维生素D2和25 ‑羟基维生素D3的目标浓度为200ng/mL， 以甲醇作 为溶剂； 高值质控品中25 ‑羟基维生素D2和25 ‑羟基维生素D3的目标浓度为800ng/mL， 以甲醇作 为溶剂； 稀释液为按照质量百分比计， 含有1％牛 血清蛋白的PBS缓冲液； 沉淀剂为浓度为0.2mo l/L的硫酸锌水 溶液； 样本萃取 液为浓度为10 00ng/mL月桂基苯甲酮的乙酸乙酯溶 液。 10.权利要求1 ‑9任一项所述的试剂 盒在非诊断和治疗目的的检测血清中25 ‑羟基维生 素D中的应用， 所述检测包括将经预 处理的样本采用高效液相色谱法分析血清中的25 ‑羟基 维生素D； 所述预处 理包括对样本进行沉淀和萃取。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115236253 A 3