(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210882591.4 (22)申请日 2022.07.26 (71)申请人 云南大学 地址 650500 云南省昆明市呈贡区云南大 学呈贡校区生态学院1栋 314室 (72)发明人 陈晓娜　闫海亚　陈善元　肖蘅　 李春青　陈钰明　刘榕　黄宗友　 李雅曼　刘永艳　 (74)专利代理 机构 宿州智海知识产权代理事务 所(普通合伙) 34145 专利代理师 董青青 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/72(2006.01)G01N 30/86(2006.01) G01N 30/89(2006.01) (54)发明名称 瘤牛锥虫病抗 性蛋白的应用 (57)摘要 本发明属于生物 技术领域， 尤其为瘤牛锥虫 病抗性蛋白应用， 本发明通过对普通牛和瘤牛的 肝脏与脾脏组织进行iTRAQ质谱检测， 分别获得 了肝脏、 脾脏的蛋白质差异表达谱， 以普通牛为 参照样本， 肝脏显著 差异蛋白总数为197个， 其中 上调蛋白127个， 下调蛋白70个， 脾脏显著 差异蛋 白质总数 142个， 其中上调蛋白77个， 下调蛋白65 个。 肝脏和脾脏中分别找到了四个差异蛋白质参 与锥虫病的抗性， 并利用平行反应检测 （PRM） 验 证了这四个差异蛋白， 显示结果与iTRAQ结果一 致， 本发明公开了四个家牛锥虫病抗性相关蛋白 质——E1BPE1、 Q1JPJ8、 P15497和Q1RMT8， 不仅为 家牛遗传改良及优化育种、 新药研发和抗病力检 测技术提供 理论基础， 也为人类健康 提供了间接 保障。 权利要求书1页 说明书12页 附图5页 CN 115290776 A 2022.11.04 CN 115290776 A 1.瘤牛锥虫病抗性蛋白， 其特征在于： 瘤牛锥虫病抗性蛋白为瘤牛中的蛋白质， 包括 E1BPE1、 Q1 JPJ8、 P15497、 Q1 RMT8。 2.根据权利 要求1所述的瘤牛锥虫病抗性 蛋白， 其特征在于： 所述E1BPE1在其对锥虫病 抗性的标志 物方面中的应用。 3.根据权利要求1所述的瘤牛锥虫病抗性蛋白， 其特征在于： 所述瘤牛中的蛋白质 Q1JPJ8在其对锥虫病抗 性的标志 物方面中的应用。 4.根据权利要求1所述的瘤牛锥虫病抗性蛋白， 其特征在于： 所述瘤牛中的蛋白质 P15497在其对锥虫病抗 性的标志 物方面中的应用。 5.根据权利要求1所述的瘤牛锥虫病抗性蛋白， 其特征在于： 所述瘤牛中的蛋白质 Q1RMT8在其对锥虫病抗 性的标志 物方面中的应用。 6.根据权利要求1所述的瘤牛锥虫病抗性蛋白， 其特征在于： 所述瘤牛中的蛋白质 E1BPE1在其对锥虫病治疗药物的靶点方面中的应用。 7.根据权利要求1所述的瘤牛锥虫病抗性蛋白， 其特征在于： 所述瘤牛中的蛋白质 Q1JPJ8在其对锥虫病治疗药物的靶点方面中的应用。 8.根据权利要求1所述的瘤牛锥虫病抗性蛋白， 其特征在于： 所述瘤牛中的蛋白质 P15497在其对锥虫病治疗药物的靶点方面中的应用。 9.根据权利要求1所述的瘤牛锥虫病抗性蛋白， 其特征在于： 所述瘤牛中的蛋白质 Q1RMT8在其对锥虫病治疗药物的靶点方面中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115290776 A 2瘤牛锥虫病抗性蛋白的应用 技术领域 [0001]本发明属于生物技 术领域， 具体涉及 瘤牛锥虫病抗 性蛋白的应用。 背景技术 [0002]家牛是全世界不可或缺的经济动物之一， 其被分为瘤牛(Bos  indicus)和普通牛 (Bos taurus)。 我国的家牛地方品种统称为中国地方黄牛， 其种质资源的遗传多样性十分 丰富， 云南瘤牛也属于我国地方黄牛品种之一， 仅分布于 云南省， 是中 国唯一的也是较为原 始的瘤牛品种。 与其他地方黄牛相比， 云南瘤牛体型结构、 外貌特征、 毛色、 角型及习性 都存 在明显差异， 尤其在较强抗蜱、 螨和牛皮蝇 蛆等体外 寄生虫， 抗某些传染病及普通病等特点 上具有较大的育种潜力。 但研究表明， 云南瘤牛对锥虫病的抗性不如普通牛， 这便影响了我 国牛业中优化遗传育种的进程。 [0003]牛锥虫病是由于个体(黄牛、 水牛、 牦牛或瘤牛)感染锥虫而发生的一种可致死性 血液原虫病， 属于人畜共患病， 主要包括 非洲锥虫病及美洲锥虫病， 该病的主要病症为进 行 性消瘦、 不定期高热、 贫血、 黄疸、 心肌能衰竭、 体表及四肢下端肿胀等。 随着世界经济贸易 的迅速发展及家牛养殖业的品种引进改良， 牛锥虫病也渐渐潜入我国， 而我国的本地黄牛 品种对此病的抗 性较弱， 因此， 牛锥虫病将是我国家牛养殖业发展工作中的一大难题。 [0004]蛋白组学是后基因组时代的一个焦点， 其相关技术的不断完善使此领域得到了极 大的进步， 这不仅为科研提供了技术支持， 也为阐明疾病机理、 保障人和 动物的健康提供了 解决途径。 化学标记法的同位素相对和绝对定量技术(Isobaric  tag for relative  and  absolute  quantification， iTRAQ)技术与高敏感度和高准确度的串联质谱及多维液相色 谱联用的技术已成为如今蛋白质定性和定量的主要研究工具。 平行反应监测技术 (parallel  reaction  monitoring， PRM)则是一种靶向质谱定量技术， 是识别和定量复杂生 物样品中特定肽段的有效方法， 具有更高的重复性及精确度， 因此现常用于特定蛋白验证。 [0005]如今牛锥虫病遍布世界， 对于牛锥虫病的研究主要集中在防治、 诊断、 分子鉴定及 分子机制研究， 从蛋白水平去探索家牛(尤其是我国地方黄牛品种)对牛锥虫病的感病机 理。 因此， 利用蛋白质组学技术探寻国内地方黄牛品种对锥虫病的抗病感病基础是我国家 牛遗传育种改良、 保种育种及新药物或疫苗研发工作中 需要克服的困难。 [0006]Indoleamine  2,3‑dioxygenase  2(Uniprot数据库登录号： E1BPE1)； thimet   oligopep tidase(Unip rot数据库登录号： Q1JPJ8)； Apolipoprotein  A‑I(Uniprot数据库登 录号： P15497)； Interleukin ‑1receptor ‑associated  kinase 4(Uniprot数据库登录号： Q1RMT8)。 发明内容 [0007]本发明提供了瘤牛锥虫病抗性蛋白的提取及应用， 目的在于解决如何检测云南瘤 牛对锥虫病抗 性的技术问题。 [0008]本发明提供如下技术方案： 瘤牛锥虫病抗性蛋白的提取及应用， 包括瘤牛中的蛋说　明　书 1/12 页 3 CN 115290776 A 3