(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210963850.6 (22)申请日 2022.08.11 (71)申请人 中国医学 科学院药用植物研究所海 南分所 地址 570311 海南省海口市秀英区药谷四 路4号 (72)发明人 赵祥升　杨美华　魏建和　 (74)专利代理 机构 北京慕达星云知识产权代理 事务所 (特殊普通合伙) 11465 专利代理师 马思瑶 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/74(2006.01) (54)发明名称 硫酸软骨素和氨基葡萄糖及其衍生物的 UPLC-PDA测定方法 (57)摘要 本发明公开了硫酸软骨素和氨基葡萄糖及 其衍生物的UPLC ‑PDA测定方法， 包括以下步骤： (1)制备样品溶液； (2)制 备标准溶液； (3)测定： 采用UPLC ‑PDA进行测定， 仪器 条件如下： 色谱柱： Waters XBridge C18(5μm， 4.6 ×150mm)； 流速： 0.3mL/min； 柱温： 35℃； 进样量： 5μL； 检测波长： 192nm； 流动相A： 乙腈， 流动相B： 浓度为10mmol/L 戊烷磺酸钠水溶液； 梯度洗脱。 本发明硫酸软骨 素和氨基葡萄糖及其衍生物的UPLC ‑PDA测定方 法耐受性、 重现性好， 硫酸软骨素和氨基葡萄糖 及其衍生物完全分离 。 权利要求书1页 说明书12页 附图4页 CN 115166102 A 2022.10.11 CN 115166102 A 1.硫酸软骨素和氨基葡萄糖及其衍生物的UPLC ‑PDA测定方法， 其特征在于， 包括以下 步骤： (1)制备样品溶液： 精密称取样品粉末0.02g， 放置于50mL具塞三角瓶中， 用5mL乙腈溶 液浸润， 以水定容至 50mL， 超声提取15mi n， 取上清液过0.22 μm滤膜， 备用； (2)制备标准溶液： 分别精密称取硫酸软骨素和氨基葡萄糖或氨基葡萄糖衍生物的对 照品5‑10mg， 用1mL乙腈浸润， 以水定容至10mL， 混匀， 制备成浓度为1mg/mL的母液， 分别取 两种对照品的母液适量， 置于同一个10mL的容量瓶中， 加水定容至刻度， 得到溶液， 用体积 比为10:90的乙腈和水混合溶液稀释该溶液得到系 列对照品溶液， 取系列对照品溶液适量， 过0.22 μm的微孔滤膜， 备用； (3)测定方法： 采用UPLC ‑PDA进行测定， 仪器条件如下： 色谱柱： Waters  XBridge C18(5 μm， 4.6×150mm)； 流速： 0.3mL/min； 柱温： 35℃； 进样量： 5 μL； 检测波长： 192nm； 流动相A： 乙 腈， 流动相B： 浓度为10m mol/L戊烷磺酸钠水 溶液； 梯度洗脱。 2.权利要求1所述UPLC ‑PDA测定方法在同时测定硫酸软骨素和氨基葡萄糖及其衍生物 中的应用。 3.根据权利 要求2所述UPLC ‑PDA测定方法在同时测定硫酸软骨素和氨基葡萄糖及其衍 生物中的应用， 其特征在于， 所述氨基葡萄糖的衍生物为氨基葡萄糖硫酸钾盐、 盐酸氨基葡 萄糖或硫酸氨基葡萄糖。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115166102 A 2硫酸软骨素和氨基葡萄糖及其 衍生物的UPL C‑PDA测定方 法 技术领域 [0001]本发明属于药品含量测定技术领域， 更具体的说是涉及硫酸软骨素和氨基葡萄糖 及其衍生物的UPLC ‑PDA测定方法。 背景技术 [0002]硫酸软骨素一般是来源于牛、 鸡、 猪、 鲨鱼的软骨， 所以这是属于一种生物医药， 一 般认为有助于治疗关节疾病， 和一些氨基葡萄糖配合止痛， 促进 软骨再生的功能， 所以它能 够减少骨关节炎的疼痛， 减少关节肿胀， 改善 关节功能， 防止积液出现或膝关节和手关节的 间隙狭窄， 提供一些垫衬作用， 缓冲冲击和摩擦， 对一些角膜胶原纤维具有保护作用， 增强 通透性改善血循环， 所以骨关节疾病比较常用。 [0003]盐酸氨基葡萄糖， 氨基葡萄糖硫酸钾盐和硫酸氨基葡萄糖等是氨基葡萄糖的一种 衍生物， 主要的作用是应用于关节炎的治疗。 氨基葡萄糖是一种 广泛存在于自然界的单糖， 可以从自然界提取， 也可以由人体自身产生， 主要作用就是抑制软骨面的破坏， 参与软骨的 合成， 抑制由于无菌性炎症对于软骨面的破坏， 在临床上广泛应用于各种关节的骨性关节 炎治疗和预防， 尤其对于髋关节、 膝关节、 踝关节的保守治疗具有重要的意 义。 [0004]针对硫酸软骨素和氨基葡萄糖含量的测定， 国家 标准(GB/T20365 ‑2006)方法的耐 受性、 重现性不好， 目标物的分离度较差(<1.2)。 特别 是成分复杂的样 品， 使用国标的方法 无法检测。 [0005]因此研发一种耐受性、 重现性好， 硫酸软骨素和氨基葡萄糖及其衍生物完全分离 的UPLC‑PDA测定方法是本领域 技术人员亟需解决的技 术问题。 发明内容 [0006]有鉴于此， 本 发明提供了一种耐受性、 重现性好， 分离度较好的硫酸软骨素和氨基 葡萄糖及其 衍生物的UPLC ‑PDA测定方法。 [0007]为了实现上述目的， 本发明采用如下技 术方案： [0008]硫酸软骨素和氨基葡萄糖及其 衍生物的UPLC ‑PDA测定方法， 包括以下步骤： [0009](1)制备样品溶液： 精密称取样品粉末0.02g， 放置于50mL具塞三角瓶中， 用5mL乙 腈溶液浸润， 以水定容至 50mL， 超声提取15mi n， 取上清液过0.22 μm滤膜， 备用； [0010](2)制备标准溶液： 分别精密称取硫酸软骨素和氨基葡萄糖或氨基葡萄糖衍生物 的对照品5 ‑10mg， 用1mL乙腈浸润， 以水定容至10mL， 混匀， 制备成浓度为1mg/mL的母液， 分 别取两种对照品母液各适量， 置于同一个10mL的容量瓶中， 加水定容至刻度， 得到溶液， 用 体积比为10:90的乙腈和水混合溶液稀释该溶液得到系列对照品溶液， 取系列对照品溶液 适量， 过0.2 2 μm的微孔滤膜， 备用； [0011](3)测定方法： 采用UPLC ‑PDA进行测定， 仪器条件如下： 色谱柱： Waters  XBridge  C18(5 μm， 4.6 ×150mm)； 流速： 0.3mL/min； 柱温： 35℃； 进样量： 5 μL； 检测波长： 192n m； 流动相 A： 乙腈， 流动相B： 浓度为10m mol/L戊烷磺酸钠水 溶液； 梯度洗脱。说　明　书 1/12 页 3 CN 115166102 A 3