(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211044685.0 (22)申请日 2022.08.30 (71)申请人 北京豪思生物科技股份有限公司 地址 102200 北京市昌平区回龙观镇科 学 园路7号院1号楼1层102-2 申请人 江苏豪思睦可生物科技有限公司 　 湖南豪思生物科技有限公司 (72)发明人 郑佳　薛元强　栗琳　周继福　 周立　张新星　丁沛瑜　苏营雪　 应洪波　 (74)专利代理 机构 北京超凡宏宇专利代理事务 所(特殊普通 合伙) 11463 专利代理师 王闯 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01)G01N 30/06(2006.01) G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 血清中茶碱和多索茶碱的检测方法 (57)摘要 本发明提供了一种血清中茶碱和多索茶碱 的检测方法， 涉及色谱检测分析技术领域。 所述 方法首先配置茶碱和多索茶碱标准品混合溶液， 并进行前处理， 随后采用反相高效液相色谱进行 分析检测， 建立标准曲线； 然后将待测血清样品 溶液进行色谱法分析检测， 采用外标法计算得到 待测血清样品中茶碱和多索茶碱的含量。 其中， 前处理包括： 将标准品混合溶液或待测血清样品 与蛋白沉淀剂混匀 后固液分离， 随后洗涤上清的 步骤。 上述方法采用茶碱和多索茶碱标准品对血 清中的茶碱和多索茶碱浓度进行检测， 具有准 确、 高效的优势 。 经验证， 能够充分满足方法验证 过程中对检出限、 精密度、 准确度和基质效应等 方面的要求。 权利要求书2页 说明书15页 附图3页 CN 115420824 A 2022.12.02 CN 115420824 A 1.一种血清中茶碱和多索茶碱的检测方法， 其特 征在于， 所述方法包括： (a)将茶碱和多索茶碱标准品溶解于稀释液中， 随后按不同浓度配置标准品混合溶液， 进行样品前处 理， 然后采用反相高效液相色谱进行分析检测， 建立标准曲线； (b)将待测血清样品溶液进行与 步骤(a)相同的前处理， 随后采用相同的色谱法进行分 析检测， 采用外标法计算得到待测血清样品中茶碱和多索茶碱的含量； 所述前处理包括： 将标准品混合溶液或待测血清样品与蛋白沉淀剂混匀后固液分离， 随后洗涤上清， 完成前处 理； 所述蛋白沉淀剂包括甲醇和/或乙腈， 优选为甲醇和乙腈。 2.根据权利要求1所述的血清中茶碱和多索 茶碱的检测方法， 其特征在于， 所述甲醇和 乙腈的质量比为0.3～1： 0.7～1， 优选为1： 1。 3.根据权利要求1所述的血清中茶碱和多索茶碱的检测方法， 其特征在于， 所述步骤 (a)中的稀释液为牛 血清或人 血清。 4.根据权利要求1所述的血清中茶碱和多索 茶碱的检测方法， 其特征在于， 所述反相高 效液相色谱法进行检测的色谱条件如下： 色谱柱： Shim ‑pack GIST C18,4.6×150mm,5 μm； 流动相组成： 名称 制备方法 流动相A 水 流动相B 甲醇 洗针液 50％甲醇 洗泵液 10％异丙醇 。 5.根据权利要求4所述的血清中茶碱和多索 茶碱的检测方法， 其特征在于， 所述反相高 效液相色谱的梯度洗脱程序为： 时间 流动相A 流动相B (min) (％) (％) 0 90 10 1 90 10 8 60 40 11 60 40 11.1 90 10 13 90 10 。 6.根据权利要求4所述的血清中茶碱和多索 茶碱的检测方法， 其特征在于， 所述反相高 效液相色谱的进样量 为10～30 μL， 优选为20 μL。 7.根据权利要求4所述的血清中茶碱和多索 茶碱的检测方法， 其特征在于， 所述反相高 效液相色谱的柱温为3 5～45℃， 优选为 40℃。 8.根据权利要求4所述的血清中茶碱和多索 茶碱的检测方法， 其特征在于， 所述流动相 流速为0.8～1.2mL/mi n， 优选为1mL/mi n。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115420824 A 29.根据权利要求1所述的血清中茶碱和多索 茶碱的检测方法， 其特征在于， 所述标准曲 线包括茶碱的标准曲线和多索茶碱的标准曲线。 10.根据权利要求9所述的血清中茶碱和多索茶碱的检测方法， 其特征在于， 所述茶碱 的标准曲线为以茶碱标准品的浓度为横坐标， 以茶碱标准品的峰面积为纵坐标， 建立的线 性回归方程； 所述多索 茶碱的标准曲线为以多索 茶碱标准品的浓度为横坐标， 以多索 茶碱标准品的 峰面积为纵坐标， 建立的线性回归方程。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115420824 A 3