(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211075324.2 (22)申请日 2022.09.04 (71)申请人 湖南新大陆生物技 术有限公司 地址 410000 湖南省长 沙市长沙高新开发 区谷苑路229号湖南麓谷国际医疗器 械产业园B4栋7层701号房 (72)发明人 罗水华　陈云　林芳　陈文　 (74)专利代理 机构 广东卓林知识产权代理事务 所(普通合伙) 44625 专利代理师 岳帅 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/04(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/72(2006.01)G01N 30/86(2006.01) G01N 30/88(2006.01) (54)发明名称 适用于干血斑样 本中维生素D的质谱检测试 剂盒及检测方法 (57)摘要 本发明提供的适用于干血斑样 本中维生素D 的质谱检测试剂盒， 包括： 包括干血斑取样片和 质谱检测套件； 所述干血斑取样片 包括能够打开 的外壳和放置在所述外壳内的维生素D冻干片； 所述质谱检测套件包括： 标准品、 内标溶液、 液相 色谱洗脱液、 蛋白沉淀剂、 复溶剂和耗材； 所述标 准品用于配置标准浓度的维生素D溶液； 所述标 准品的外表面标记有用于配置的浓度和 需加入 复溶剂的体积， 所述标准品内含有与标示浓度匹 配的定量的维生素D的冻干粉， 加入标示体积的 复溶剂后即可配置为标示浓度的维生素D溶液。 本发明提供的适用于干血斑样 本中维生素D的质 谱检测试剂盒， 具有良好的生物稳定性和安全 性， 适用于边远地区样本采集、 储 存与运输 。 权利要求书1页 说明书4页 附图1页 CN 115326993 A 2022.11.11 CN 115326993 A 1.适用于干血斑样本 中维生素D的质谱检测试剂 盒， 其特征在于， 包括干血斑取样片和 质谱检测套件； 所述干血斑取样片包括能够打开的外壳和放置在所述外壳内的维生素D冻干片， 所述 维生素D冻干片中的维生素D的含量为标准值， 所述 维生素D冻干片的上表面为凹面， 且为多 孔蜂窝结构； 所述质谱检测套件包括： 标准品、 内标溶液、 液相色谱洗脱液、 蛋白沉淀剂、 复溶剂和耗 材； 所述标准品用于配置标准浓度的维生素D溶 液； 所述标准品的外表面标记有用于配置的浓度和需加入 复溶剂的体积， 所述标准品内含 有与标示浓度匹配的定量的维生素D的冻干粉， 加入标示体积的复溶剂后即可配置为标示 浓度的维生素D溶 液； 所述标准品至少有六个， 标示浓度从低到高； 所述复溶剂为 不含待测维生素D的空白人 血清基质。 2.根据权利要求1所述的适用于干血斑样本中维生素D的质谱检测试剂盒， 其特征在 于， 所述液相色谱洗脱液包括流动相A和流动相B， 流动相A为标准浓度的甲酸水溶液， 流动 相B为标准浓度的 甲酸甲醇溶 液。 3.根据权利要求1所述的适用于干血斑样本中维生素D的质谱检测试剂盒， 其特征在 于， 所述内标 溶液由含有VD3 ‑d6和VD2‑d6的同位素内标 溶液组成。 4.根据权利要求1所述的适用于干血斑样本中维生素D的质谱检测试剂盒， 其特征在 于， 所述蛋白沉淀剂为乙腈和异丙醇的混合液， 所述乙腈和异丙醇的体积比为1:1。 5.一种干血斑样本中维生素D的检测方法， 其特征在于， 采用如权利要求1 ‑4任一项所 述的检测试剂盒进行检测， 步骤1制备干血斑样本： 打开外壳， 将全血滴加在维生素D冻干片的上表面， 自然干燥后 关闭外壳； 步骤2拟合标准曲线方程： 分别向每个标准品中加入标示体积的复溶剂， 从而配置成标 示浓度的维生素D溶 液； 分别向上述配置的每 份维生素D溶 液中加入等 量的内标 溶液和蛋白沉淀剂； 随机抽取至少3个标准品使用液质联用仪检测， 并拟合每一种维生素D溶液所对应的标 准曲线方程； 使用液质联用仪以及得到的标准曲线方程检测剩余标准品中维生素D溶液的浓度， 判 断检测结果是否在预设的范围内， 如果是， 则标准曲线方程有效； 步骤3检测样品： 取出含有干血斑样本 中维生素D冻干片， 使用复溶剂对维生素D冻干片 进行复溶制备成待测溶液， 使用液质联用仪以及步骤2中得到的标准 曲线方程对待测溶液 中的维生素D溶 液进行检测。 6.根据权利要求5所述的一种干血斑样本中维生素D的检测方法， 其特征在于， 标准品 和待测样品中加入的内标 溶液的量相同。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115326993 A 2适用于干血斑样本中维生素D的质谱检测试剂盒及检测方 法 技术领域 [0001]本发明属于维生素检测领域， 特别涉及适用于干血斑样本中维生素D的质谱检测 试剂盒及检测方法。 背景技术 [0002]维生素(vitamin)是人和动 物为维持正常的生理功能而必需从食物中获得的一类 有机物质， 在人体生长和代谢过程中发挥着极其重要的作用。 机体缺 乏维生素将引起代谢 障碍， 并发生各种疾病， 这类疾病统称为维生素缺 乏症。 目前， 根据溶解性可将维生素分为 脂溶性维生素和水溶性维生素两大类， 水溶性维生素包括B族维生素和维生素C等； 脂溶性 维生素是一种含有环结构和长 脂肪族烃链的一组维生素， 包括维生素A、 D、 E和K等。 [0003]其中， 维生素D可维持血清钙磷浓度的稳定， 血钙浓度低时， 诱导甲状旁腺素分泌， 将其释放至肾及骨细胞。 维生素D促进怀孕及哺乳期输送钙到子体1位羧基化酶除受血清中 钙磷浓度及膳食中钙磷供给量的影响外， 还受激素的影响， 停经后的妇女VD3浓度减低， 易 有骨质软化等症状。 VD3对小肠作用为诱导合 成cabp.1， 与小肠细胞的受体形成复合体进入 细胞核染色体上， 促使cabp的信使mRNA的合成， 此mRNA在胞浆内转录为cabp。 维生素D能促 进钙磷的吸收， 又可将钙磷从骨中动员出来， 使 血浆钙、 磷达到正常值， 促使骨的矿物化， 并 不断更新。 [0004]因此， 对维生素D的检测具有重要意义， 但是目前的检测方法通常为对血清/血浆 的质谱检测， 当样本运输距离远， 时间长时， 血清/血浆 容易失效。 发明内容 [0005]针对现有技术中的缺陷， 本发明提供一种适用于干血斑样本中维生素D的质谱检 测试剂盒及检测方法， 具有良好的生物稳定性和安全性， 适用于边远地区样 本采集、 储存与 运输。 [0006]本发明提供的适用于干血斑样本中维生素D的质谱检测试剂盒， 包括： 干血斑取样 片和质谱检测套件； [0007]所述干血斑取样片包括能够打开的外壳和放置在所述外壳内的维生素D冻干片， 所述维生素D冻干片中的维生素D的含量为标准值， 所述 维生素D冻干片的上表 面为凹面， 且 为多孔蜂窝结构； [0008]所述质谱检测套件包括： 标准品、 内标溶液、 液相色谱洗脱液、 蛋白沉淀剂、 复溶剂 和耗材； [0009]所述标准品用于配置标准浓度的维生素D溶 液； [0010]所述标准品的外表面标记有用于配置的浓度和需加入复溶剂的体积， 所述标准品 内含有与标示浓度匹配的定量的维生素D的冻干粉， 加入标示体积的复溶剂后即可配置为 标示浓度的维生素D溶 液； 所述标准品至少有六个， 标示浓度从低到高； [0011]所述复溶剂为 不含待测维生素D的空白人 血清基质。说　明　书 1/4 页 3 CN 115326993 A 3