(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111588034.3 (22)申请日 2021.12.23 (71)申请人 山西省肿瘤医院 地址 030012 山西省太原市杏 花岭区职工 新街3号 (72)发明人 李峰　陈允清　张铭　吕永强　 赵晋炜　张勇　 (74)专利代理 机构 北京中索 知识产权代理有限 公司 11640 代理人 秦国鹏 (51)Int.Cl. C12N 15/85(2006.01) C12N 5/10(2006.01) C12N 15/113(2010.01) A61K 48/00(2006.01)A61P 35/00(2006.01) A61P 35/04(2006.01) (54)发明名称 一种对胃癌具有治疗作用的过表达RNU12载 体 (57)摘要 本发明属于医药科技技术领域， 具体为一种 对胃癌具有治疗作用的过表达RNU12载体， 能够 抑制胃癌细胞的增殖、 迁移和促进胃癌细胞的凋 亡。 发明了一种pCMV6 ‑R， 可化学合成， 具有促进 RNU12表达， 对胃癌具有潜在的治 疗作用。 权利要求书1页 说明书8页 附图3页 CN 114250248 A 2022.03.29 CN 114250248 A 1.一种对胃癌具有 治疗作用的过表达RNU12载体， 其特 征在于： 命名为pC MV6‑R： 正义:5’ ‑CACGCCTAAAAAGTAGACTGAC ‑3’ 反义:5’ ‑TAACGGAGAAAACAACGAAAAAA‑3’。 2.根据权利要求1所述的一种对胃癌具有治疗作用的过表达RNU12载体， 其特征在于： RNU12抑制胃癌细胞的增殖 体外实验： 在两个胃癌细胞系HGC ‑27和MGC‑803中， 构建了一个包含RNU12 ‑ORF的脂质 载体(pCMV 6‑R)， 分别转染到两个细胞中， 通过CC K8(CellCountingKit ‑8)实验， 在0、 12、 24、 48、 72和96h后， 与空载脂质体(pCMV 6‑NC)进行比较， 发现过表达RNU12能显著抑制HGC ‑27和 MGC‑803细胞增殖； 体内实验： 用携带RNU12 ‑ORF的慢病毒感染HGC ‑27和MGC‑803细胞， 在免疫缺陷裸鼠后 侧皮下注射(3 ×106细胞/只)， 在7周后发现注射过表达RNU12(pCMV6 ‑R)的裸鼠肿瘤体积明 显小于对照组(pC MV6‑NC)的裸鼠。 3.根据权利要求1所述的一种对胃癌具有治疗作用的过表达RNU12载体， 其特征在于： RNU12抑制胃癌细胞的侵 袭 体外实验： 在两个胃癌细胞系HGC ‑27和MGC‑803中， 构建了一个包含RNU12 ‑ORF的过表 达脂质载体(pCMV6)， 分别转染到两个细胞中进行侵袭实验， 在Transwell滤膜上加入40μ Lmatrigel(0.5g/L)； 收集转染空载体pCMV 6‑NC以及pCMV 6‑R的HGC‑27和MGC‑803细胞， 离心 重悬细胞， 计数调 整为2×105cell/mL， 在Transwell小室中加入400 μL细胞悬液， 下室沿侧 壁加入600 μL含10％胎牛血清的DMEM培养基， 37℃、 5％CO2恒 温箱中培养24h， 取出小室， 吸 干上室固定液， 甲醇固定后移到预先加入8 00 μL的结晶紫 染液的孔中染色； 显微镜下拍照并 计数侵袭细胞数， 发现过表达RNU12能显著抑制HGC ‑27和MGC‑803细胞侵袭； 体内实验： 用携带RNU12 ‑ORF的慢病毒感染HGC ‑27和MGC‑803细胞， 通过免疫缺陷裸鼠 尾静脉注射到体内， 5周后处死裸鼠发现， 注 射过表达RNU12(pCMV6 ‑R)的裸鼠肝脏肿瘤细胞 转移数量明显低于注射对照组(pC MV6‑NC)的裸鼠。 4.根据权利要求1所述的一种对胃癌具有治疗作用的过表达RNU12载体， 其特征在于： RNU12促进胃癌细胞的凋亡 在HGC‑27和MGC‑803细胞中， 通过流式细胞术分析表明， 与空载脂质体(pCMV6 ‑NC)相 比， 过表达RNU12(pCMV6 ‑R)能显著促进HGC ‑27和MGC‑803细胞早期和晚期凋亡； 而RNU12在 MAPK通路中能介导许多分子mRNA稳定性与肿瘤的发生发展相关。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114250248 A 2一种对胃癌具有治疗作用的过表达RNU12载体 技术领域 [0001]本发明涉及医药科技技术领域， 具体为一种对胃癌具有治疗作用的过表达RNU12 载体。 背景技术 [0002]胃癌是胃粘膜上皮细胞最为常见的恶性肿瘤之一， 在发展中国家尤其是在中国， 胃癌的发病率和死亡率均居世界前列， 尤其是山西更是重中之重。 尽管外科手术仍被认为 是胃癌治疗的最主要手段， 但胃癌患者5年生存率仍不 足20％。 因此， 除了传统的治疗方法， 探索胃癌发生发展的潜在分子机制并寻找有效的靶向药物已成为胃癌治疗的关键问题。 越 来越多的研究发现， 长链非编码RNA(LncRNAs)的异常表达有可能引起细胞生物学行为 发生 变化， 导致肿瘤的发生。 目前这一类小分子基因的功能以及与此相关的基因调控已成为肿 瘤研究的重点。 因此， 通过对胃癌一种LncRNAs(RNU12)的深入研究， 为胃癌的早诊早治及预 后恢复提供重要的理论 意义。 发明内容 [0003]本部分的目的在于概述本发明的实施方式的一些方面以及简要介绍一些较佳实 施方式。 在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使 本部分、 说明书摘要和发明名称的目的模糊， 而这种简化或省略不能用于限制 本发明的范 围。 [0004]鉴于现有技 术中存在的问题， 提出了 本发明。 [0005]本文发现了 RNU12在胃癌中表达下调， 具有抑制胃癌细胞增殖、 迁移和促进凋亡的 作用， 并且发现了一种pCMV6 ‑R， 可化学合成， 具有过表达RNU12， 对胃癌具有潜在的治疗作 用。 [0006]为解决上述 技术问题， 根据本发明的一个方面， 本发明提供了如下技 术方案： [0007]一种对胃癌具有 治疗作用的过表达RNU12载体； [0008]命名为pC MV6‑R： [0009]正义:5’ ‑CACGCCTAAAAAGTAGACTGAC ‑3’ [0010]反义:5’ ‑TAACGGAGAAAACAACGAAAAAA‑3’。 [0011]作为本发明所述的一种对胃癌具有治疗作用的过表达RNU12载体的一种优选方 案， 其中： RNU12抑制胃癌细胞的增殖 [0012]体外实验： 在两个胃癌细胞系HGC ‑27和MGC‑803中， 构建了一个包含RNU12 ‑ORF的 脂质载体(pCMV6 ‑R)， 分别转染到两个细胞中， 通过CCK8(CellCountingKit ‑8)实验， 在0、 12、 24、 48、 72和96h后， 与空载脂质体(pCMV6 ‑NC)进行比较， 发现过表达RNU12能显著抑制 HGC‑27和MGC‑803细胞增殖； [0013]体内实验： 用携带RNU12 ‑ORF的慢病毒感染HGC ‑27和MGC‑803细胞， 在免疫缺陷裸 鼠后侧皮下注 射(3×106细胞/只)， 在7周后发现注射过表达RNU12(pCMV6 ‑R)的裸鼠肿瘤体说　明　书 1/8 页 3 CN 114250248 A 3