(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202111640368.0 (22)申请日 2021.12.2 9 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114272390 A (43)申请公布日 2022.04.05 (73)专利权人 中山大学附属第一医院 地址 510080 广东省广州市中山 二路58号 (72)发明人 匡铭　郭宇　黄曼玲　廖俊彬　 戴子浩　陈泽斌　肖晗　陈志航　 梅洁　刘海宁　程权永　沈顺利　 杨佳丽　 (74)专利代理 机构 广州致信 伟盛知识产权代理 有限公司 4 4253 专利代理师 彭玲(51)Int.Cl. A61K 47/68(2017.01) A61K 47/60(2017.01) A61K 31/713(2006.01) A61K 38/05(2006.01) A61K 38/47(2006.01) A61K 41/00(2020.01) A61K 45/06(2006.01) A61K 47/34(2017.01) A61P 15/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) 审查员 王雪颖 (54)发明名称 一种微环境靶向联合细胞靶向肿瘤抑制载 体及其制备方法和应用 (57)摘要 本发明公开了一种微环境靶向联合细胞靶 向肿瘤抑制载体及其制备方法和应用， 所述靶向 肿瘤抑制载体具有核 ‑壳双层结构， 以在接触胎 盘组织间液高表达的酶的作用下靶向崩解的酶 底物多肽 ‑PEG修饰的脂质双分子膜作为外壳， 以 胎盘滋养细胞表面特异性高表达标志物抗体修 饰的药物载体作为内核， 所述药物载体为聚乙二 醇修饰的聚阳离子载体与疏水性可 降解聚酯形 成的共聚物。 本发明的靶向肿瘤抑制载体可有效 避免母体胎盘外其他器官和胎儿非特异性药物 吸收， 进而实现对胎盘内滋养细胞特异性药物的 递送和功能调控。 权利要求书1页 说明书12页 附图1页 CN 114272390 B 2022.09.02 CN 114272390 B 1.一种微环境靶向联合细胞靶向肿瘤抑制载体， 其特征在于， 所述靶向肿瘤抑制载体 具有核‑壳双层结构， 其中， 以在接触胎盘组织间液高表达的酶的作用下靶向崩解的酶底物 多肽‑PEG修饰的脂质双分子膜作为外壳， 以胎盘滋养细胞表面特异 性高表达的标志物 抗体 修饰的药物载体作为内核， 所述胎盘组织间液高表达的酶为基质金属蛋白酶13； 所述药物 载体为聚乙二醇修饰的聚阳离子载体与疏水性可降解聚酯形成的共聚物； 所述共聚物为聚 乙二醇‑聚乙烯亚胺 ‑聚己内酯PEG ‑PEI‑PCL； 所述胎盘滋养细胞表面特异性高表达的标志 物抗体为细胞角蛋白Cytokeratin  7的Fab段； 所述药物载体中负载超顺磁性四氧化三铁 SPIO纳米粒子、 调控胎盘滋养细胞功能的小分子药物和治疗基因； 所述小分子药物为 Bortezomib， 所述治疗基因为抑制DEFA1B基因表达的siRNA； 所述靶向肿瘤抑制载体的平均粒径为80nm ‑210nm； 所述酶底 物多肽为M CA‑Lys‑Pro‑Leu‑Gly‑Leu‑DNP‑Dpa‑Ala‑Arg‑NH2。 2.根据权利要求1所述的微环境靶向联合细胞靶向肿瘤抑制载体， 其特征在于， 所述靶 向肿瘤抑制载体的平均粒径为10 0nm‑210nm。 3.权利要求1 ‑2任一项所述的微环境靶向联合细胞靶向肿瘤抑制载体的制备方法， 其 特征在于， 包括以下步骤： S1、 将超顺磁性四氧化三铁SPIO纳米粒子、 调控胎盘滋养细胞功能的小分子药物和治 疗基因负载到共聚物， 得到复合纳米粒子； S2、 将胎盘滋养细胞表面标志 物抗体链接 到复合纳米粒子， 得到抗体复合纳米粒子； S3、 将基质金属蛋白酶13底 物多肽链接PEG， 得到多肽 ‑PEG； S4、 将多肽 ‑PEG和脂质体混合形成多肽 ‑PEG修饰的脂质双分子膜； S5、 将多肽 ‑PEG修饰的脂质双分子膜与抗体复合纳米粒子组装成靶向肿瘤抑制载体。 4.权利要求3所述的微环境靶向联合细胞靶向肿瘤抑制载体的制备方法， 其特征在于， 步骤S1中， 共聚物和超顺磁性四氧化 三铁SPIO纳米粒子的质量比为5 ‑15:1。 5.权利要求1 ‑2任一项所述的纳米药物递送系统在制备调控胎盘滋养细胞功能失调疾 病药物中的应用， 所述调控胎盘滋养细胞功能失调疾病为妊娠合并滋养细胞肿瘤。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114272390 B 2一种微环境靶向联合细胞靶向肿瘤抑制载体及其制备方 法和 应用 技术领域 [0001]本发明涉及 生物医学工程领域， 具体涉及 一种微环境靶向联合细胞靶向肿瘤抑制 载体及其制备 方法和应用。 背景技术 [0002]以往妊娠期间的恶性肿瘤并不常见， 但随着近年来平均妊娠年龄的推迟、 “二孩” 政策的开放， 以及辅助生殖技术的发展， 妊娠合并恶性肿瘤的发病率逐渐升高。 有报道显 示， 2010～2019年北京市非直接产科因素导致的孕产妇死亡中， 恶性肿瘤占7.14％。 妊娠合 并恶性肿瘤进入孕产妇死亡原因前五位， 给母儿安全带来巨大影响 【实用妇产科杂志, 2021,37(03):178 ‑180. 】 。 在妊娠合并恶性肿瘤中， 处理最为棘手的是发病于孕妇胎盘部位 的妊娠合并滋养细胞肿瘤。 此类肿瘤的病理学特点为， 肿瘤发生于胎盘种植部位， 为体积大 小不一的实体肿瘤， 瘤体可局限于子宫， 也可突向宫腔呈息肉状， 或侵入肌层甚至穿破浆 膜， 形成转移 【实用妇产科杂志,2006(09):548 ‑549. 】 。 该类肿瘤存在于胎盘中， 与胎盘组织 密不可分， 无法采用手术手段进 行处理， 如果采用药物治疗， 往往伤及胎儿导致流产。 所以， 如果能够实现对胎盘中滋养细胞来源肿瘤细胞的特异性杀伤， 将有效控制该类无有效治疗 手段疾病的进 展。 [0003]滋养细胞肿瘤的发生发展与NF ‑κB通路的过度激活有关， 【Sci  Rep.2020  Aug 20； 10(1):14033； 细 胞与分子免疫学杂志,2012,28(10):1084 ‑1087. 】 Bortezomib(PS ‑341)是 一种可逆性和选择性的蛋白酶体抑制剂， 具有破坏细胞周期、 诱导细胞凋 亡以及抑制核因 子NF‑κB的功能， 具有抗癌活性 【Blood.2018  Dec 13； 132(24):2546 ‑2554； Protein   Cell.2018  Sep； 9(9):770 ‑784.】 。 所以， 我们期望采用Bortezomib实现对滋养细胞肿瘤的 抑制。 DEFA1B(Defensin  Alpha 1B)是一种与紫杉醇等化疗药反应情况和耐药相关的基因 【Onco Targets Ther.2015 Jul 30； 8:1915 ‑22. 】 。 并且， 对其进行抑制， 本身 也可以有效抑 制TB和TB相关肿瘤的活性。 在我们的前期实验中已发现， 这两种药物联合治疗滋养细胞肿 瘤可以获得较好的抑制效果。 所以， 如果能够将滋养细胞肿瘤抑制药物递送至胎盘中的病 变细胞， 就可以预期实现较好的治疗效果。 [0004]然而， 现有可能具有TB功能调控作用或滋养细胞肿瘤抑制效果的药物均不可避免 地在母体各器官分布， 并通过胎盘， 向胎儿分布。 这些药物在TB功能调控的同时， 会产生对 母体和胎 儿的毒性。 目前包括急救药品在内的孕妇用药均存在极多的禁忌， 孕妇的药物使 用和新药开发中首先面临的问题是， 需要考虑对药物在母体和胎 儿的分布和毒性问题。 绝 大多数的药物可以通过胎盘， 分布进入胎 儿侧， 影响胎儿发育。 因此， 目前在体外实验中实 现TB的EMT、 促血管生成等功能调控的药物， 无法真正在保证用药安全的前提下， 实现胎盘 内TB功能调控。 因此， 如何避免对母体和胎儿的毒性， 实现TB功能调控 药物对胎盘中TB的精 准递送， 是解决TB功能失调所致妊娠合并滋养细胞肿瘤等疾病症状的关键 。 [0005]目前研究者尝试过的可能促进TB特异性纳米药物递送的手段有2种， 一种是通过说　明　书 1/12 页 3 CN 114272390 B 3