(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202111624399.7 (22)申请日 2021.12.28 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114288333 A (43)申请公布日 2022.04.08 (73)专利权人 中国科学院植物研究所 地址 100093 北京市海淀区香 山南辛村20 号 (72)发明人 石雷　黄业钦　夏菲　李慧　 莫美玲　白红彤　 (74)专利代理 机构 北京智为时代知识产权代理 事务所(普通 合伙) 11498 专利代理师 王加岭　杨静 (51)Int.Cl. A61K 36/53(2006.01) A61P 35/00(2006.01)B82Y 5/00(2011.01) B82Y 40/00(2011.01) A61K 135/00(2006.01) A61K 127/00(2006.01) A61K 133/00(2006.01) A61K 31/015(2006.01) A61K 31/35(2006.01) A61K 31/122(2006.01) A61K 31/045(2006.01) A61K 31/125(2006.01) (56)对比文件 KR 2021010891 1 A,2021.09.0 3 Pavithra P.S.等.Es sential o ils: from preventi on to treatment of sk in cancer. 《Drug Discovery Today》 .2019,第24卷(第2 期), 审查员 张娜 (54)发明名称 一种抑制皮肤黑素瘤细胞增殖的迷迭香复 方精油及其用途 (57)摘要 本发明提供一种抑制皮肤黑素瘤细胞增殖 的迷迭香复方精油及其在制备抑制皮肤黑素瘤 细胞增殖药物中的用途。 本发明提供的抑制皮肤 黑素瘤细胞增殖的迷迭香复方精油， 各原料的质 量份数如下： α ‑蒎烯型迷迭香精油25 ‑30份、 马 鞭草烯酮型迷迭香精油10 ‑15份和1,8 ‑桉叶素型 迷迭香精油5 ‑8份。 通过比较不同化学型精油对 于黑素瘤细胞B16 ‑F10的IC50， 并进行不同化学 型精油的组分配比， 最终筛选出抑制B16 ‑F10增 殖作用最强的复方精油配方； 进一步通过实验探 索迷迭香复方精油不同浓度对细胞周期变化的 影响， 证明迷迭香复方精油对黑素瘤细胞的显著 的抑制作用。 权利要求书1页 说明书7页 附图3页 CN 114288333 B 2022.10.21 CN 114288333 B 1.一种抑制皮肤黑素瘤细胞增殖的迷迭香复方精油， 其特征在于， 各原料的质量份数 如下： α‑蒎烯型迷迭香精油25 ‑30份、 马鞭草烯酮型迷迭香精油10 ‑15份和1,8 ‑桉叶素型迷 迭香精油5 ‑8份， 其中， α ‑蒎烯型迷迭香精油主要成分为α ‑蒎烯28.32%、 1,8 ‑桉叶素20.48%、 马鞭草烯酮14.21%和龙脑  5.22%； 马鞭草烯酮型迷迭香精油主要成分为马鞭草烯酮 24.46%、 1,8 ‑桉叶素10.48%、 α ‑萜品醇7.12%和龙脑5.88%； 1,8 ‑桉叶素型迷迭香精油主要成 分为1,8‑桉叶素25.46%、 马鞭草烯酮13%、 α ‑蒎烯11.96%和樟脑1 1.38%。 2.根据权利要求1所述的迷迭香复方精油， 其特征在于， 主要成分为α ‑蒎烯18.56% ‑ 20.59%、 马鞭草烯酮16.70% ‑19.67%、 1,8 ‑桉叶素17.70% ‑19.06%和龙脑5.54% ‑5.99%。 3.根据权利要求1或2所述的迷迭香复方精油， 其特征在于， 所述迷迭香精油为通过水 蒸气蒸馏法提取迷迭香 地上部分制得， 所述的迷迭香 地上部分包括枝、 叶和/或花。 4.权利要求1或2所述的迷迭香复方精油的制备方法， 其特征在于， 将各原料按照质量 份数混合后， 将 复方精油进行纳米化破碎、 均质、 分散、 过筛， 形成粒径在10 ‑30nm的纳米颗 粒。 5.权利要求1或2所述的迷迭香复方精油在制备抑制皮肤黑素瘤细胞增殖药物中的用 途。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114288333 B 2一种抑制皮肤黑素瘤细胞增殖的迷迭 香复方精油及其用途 技术领域 [0001]本发明属于植物天然提取物的药理学领域， 具体涉及一种迷迭香复方精油抑制黑 素瘤细胞增殖的新用途。 背景技术 [0002]黑素瘤(melanom a)是由黑色素细胞恶变而来的一种高度 恶性肿瘤， 已成为全世界 发病率增长最快 的恶性肿瘤之一。 研究表明， 近20年来中国皮肤恶性肿瘤特别是恶性黑素 瘤， 有明显增加的趋势。 目前， 精油作为一种风险较小的非侵入性治疗方法， 可以潜在地提 高癌症患者的生活质量， 并减轻癌症患者接受化疗的症状， 同时减轻副作用， 改善预后状 况。 其中迷迭香精油已被证明具有良好的抗氧化、 抗炎等活性， 并且对乳腺癌、 肺癌、 结肠 癌、 膀胱癌和宫颈癌细胞 具有一定的抗增殖作用， 能促进肝癌细胞的凋亡。 [0003]目前迷迭香精油的抗癌方面研究较少， 不够深入， 多为精油进行不同浓度处理细 胞24小时或48小时后通 过MTT法检测细胞活力， 并计 算其IC50。 通过MTT法发现迷迭香精油对 人乳腺癌细胞MDA ‑MB‑231,肺腺癌细胞A549， 人非小细胞肺癌细胞H1299， 人乳腺癌细胞 MCF‑7， 宫颈癌H eLa， 人T淋巴瘤细胞Jurkat， 人结肠癌细胞HT ‑29和人膀胱癌细胞T24具有 抗 增殖作用， 并且 可以增强肝癌细胞HepG2中bax的表达， 减少其bcl ‑2的表达， 诱导其凋亡， 精 油成分的差异也会对瘤细胞造成不同的影响。 但目前迷迭香挥发物精油对于黑素瘤细胞的 抑制作用尚无报道， 仅有非挥发性成分迷迭香酸等对皮肤黑素瘤细胞生成的影响。 此外， 已 报道的迷迭香精油抑癌技术中涉及的精油存在使用率低、 化学型单一、 效果不佳等不 足， 而 采用不同化学 型进行制备的复方精油更 是少见。 发明内容 [0004]针对以上问题， 本发明提供一种迷迭香复方精油在抑制皮肤黑素瘤细胞增殖药物 中的用途及其制备方法。 本发明主要步骤包括： ①迷迭香精油的提取； ②精油成分分析； ③ 复方精油制备； ④复方精油成分分析； ⑤结合黑素瘤细胞B16 ‑F10和HaCaT的毒性 实验， 确定 使用浓度范围。 [0005]本发明旨在 通过不同化学型的迷迭香精油针对黑素瘤细胞的处理， 以正常皮肤细 胞HaCaT为对照， 并通过细胞周期变化的分析， 证明迷迭香精油抑制黑素瘤细胞增殖的作 用， 同时将不同化学型迷迭香精油制备成迷迭香复方精油， 再次针对黑素瘤细胞的处理， 以 正常皮肤细胞HaCaT为对照， 并通过细胞周期 变化的分析， 筛选出抗癌活性更强的迷迭香精 油配方和浓度。 [0006]首先， 本发明提供一种迷迭香复方精油在抑制皮肤黑素瘤细胞增殖药物中的用途 及其制备 方法。 [0007]在本发明所采用的技 术方案如下： [0008]1、 一种迷迭香复方精油， 各原料的质量份数如下： α ‑蒎烯型迷迭香精油25 ‑30份、 马鞭草烯酮型迷迭香精油10 ‑15份和1,8 ‑桉叶素型迷迭香精油5 ‑8份。说　明　书 1/7 页 3 CN 114288333 B 3