(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202111643701.3 (22)申请日 2021.12.2 9 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114276454 A (43)申请公布日 2022.04.05 (73)专利权人 华道 （上海） 生物医药有限公司 地址 201616 上海市松江区鼎源路618弄 1 号29幢709室 (72)发明人 狄升蒙　石磊　陈鑫　冯冬歌　 李照润　田琳　余学军　梁辉　 (74)专利代理 机构 北京品源专利代理有限公司 11332 专利代理师 赵颖 (51)Int.Cl. C07K 16/30(2006.01) C07K 16/28(2006.01)C07K 19/00(2006.01) C12N 15/13(2006.01) C12N 15/867(2006.01) C12N 15/62(2006.01) C12N 7/01(2006.01) C12N 5/10(2006.01) A61K 39/395(2006.01) A61K 39/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (56)对比文件 CN 113784986 A,2021.12.10 CN 110055269 A,2019.07.26 CN 108864310 A,2018.1 1.23 CN 109306014 A,2019.02.0 5 审查员 王雨方 (54)发明名称 一种抗间皮素的纳米抗体及其应用 (57)摘要 本发明提供一种抗间皮素的纳米抗体及其 应用。 所述纳米抗体的CDR3的氨基酸序列包括 SEQ ID NO.8、 SEQ  ID NO.9或SEQ  ID NO.10所示 的序列。 本发 明的抗间皮素的纳米抗体可特异性 的结合间皮素抗原， 且亲和力较好， 将其作为抗 原结合结构域构建嵌合抗原受体和CAR ‑T细胞， 对间皮素 阳性的肿瘤细胞具有明显的杀伤活性。 权利要求书1页 说明书14页 序列表10页 附图8页 CN 114276454 B 2022.12.20 CN 114276454 B 1. 一种抗间皮素的纳米抗体， 其特征在于， 所述纳米抗体的CDR1的氨基酸序列为SEQ   ID NO.1所示的序列， CD R2的氨基酸序列为SEQ  ID NO.5所示的序列， CDR3的氨基酸序列为 SEQ ID NO.8所示的序列。 2.一种核酸分子， 其特征在于， 所述核酸分子为权利要求1所述的抗间皮素的纳米抗体 的编码基因。 3.一种嵌合抗原受体， 其特征在于， 所述嵌合抗原受体由CD8α信号肽、 权利要求1所述 的抗间皮素的纳米抗体、 CD8α 铰链区、 CD8α 跨膜区、 4 ‑1BB胞内区和免疫受体酪氨酸活化基 序组成。 4.一种表达载体， 其特征在于， 所述表达载体包括权利要求3所述的嵌合抗原 受体的编 码基因。 5.根据权利要求4所述的表达载体， 其特征在于， 所述表达载体为含有权利要求3所述 的嵌合抗原受体的编 码基因的慢病毒载体、 逆转录病毒载体或腺相关病毒载体中的任意一 种。 6.根据权利要求4所述的表达载体， 其特征在于， 所述表达载体为含有权利要求3所述 的嵌合抗原受体的编码基因的慢病毒载体。 7.一种重组慢病毒， 其特 征在于， 所述重组慢病毒含有权利要求 4所述的表达载体。 8.一种嵌合抗原受体免疫细胞， 其特征在于， 所述嵌合抗原受体免疫细胞表达权利要 求3所述的嵌合 抗原受体； 所述嵌合抗原受体免疫细胞包括权利要求4所述的表达载体和/或权利要求7所述的重 组慢病毒； 所述嵌合 抗原受体免疫细胞为T细胞和/或NK细胞。 9.一种药物组合物， 其特征在于， 所述药物 组合物包括权利要求8所述的嵌合抗原受体 免疫细胞。 10.根据权利要求9所述的药物组合物， 其特征在于， 所述药物组合物还包括药学上可 接受的辅料。 11.根据权利要求10所述的药物 组合物， 其特征在于， 所述辅料包括载体、 润湿剂、 增溶 剂、 渗透压调节剂、 包衣材料、 着色剂、 pH调节剂、 抗氧剂、 抑菌剂或缓冲剂中的任意一种或 至少两种的组合。 12.如权利要求3所述的嵌合抗原受体、 权利要求8所述的嵌合抗原受体免疫细胞或权 利要求9所述的药物组合物在制备肿瘤治疗药物中的应用； 所述肿瘤为表达间皮素的肿瘤。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114276454 B 2一种抗间皮素的纳米抗体及其应用 技术领域 [0001]本发明属于生物医药技 术领域， 具体涉及一种抗间皮素的纳米抗体及其应用。 背景技术 [0002]间皮素(mesothelin， MSLN)是一种细胞表面糖蛋白， MSLN的cDNA包含一段1884bp 的开放阅读框， 共有17个外显子， 编码由628个氨基酸组成的相对分子质量约为69kDa的前 体蛋白， 经糖基化后被弗林蛋白酶切割产生相 对分子质量分别约为40kDa和 31kDa的2个蛋 白， 羧基端的疏水序列被糖基磷脂酰肌醇取代并锚定在细胞膜上， 分子量约为40kDa， 称为 间皮素； 氨基端部分释放进入血液或进一步降解， 分子量约为31kDa， 称为巨核细胞集落刺 激因子(megakaryocyte ‑potentiating  factor， MPF)(参见： Chang,K.&Pastan, I.Molecular  cloning ofmesothelin,a  differentiation  antigen present on  mesothelium,mesotheliomas,and  ovarian cancers.Proceedings  of the National   Academy of Sciences  of the United States of America 93,136‑140,doi:10.1073/ pnas.93.1.136(1996).)。 目前研究表明MSLN参与调 控细胞的存活、 增殖以及迁移， 并且能 使细胞抵抗部分细胞毒性药物的杀伤(Tang,Z.,Qian,M.&Ho,M.The  role of mesothelin   in tumor progression  and targeted  therapy.Anti ‑cancer agents in medicinal   chemistry 13,276‑280,doi:10.2174/1871520 611313020014(2013).)。 [0003]MSLN是一种分化抗原， 在胰腺癌、 恶性间皮瘤、 卵巢癌和非小细胞肺癌等肿瘤组织 中高表达(参见： Baldo,P.&Cecco,S.Amatuximab  and novel agents targeting   mesothelin  for solid tumors.OncoTargetsand  therapy 10,5337‑5353,doi:10.2147/ ott.s145105(2017).)。 免疫组织化学染色表明： 在大多数的胰腺癌组织中(75％ ‑100％) MSLN表达呈阳性， 然而， 在大多数的慢性胰腺炎组织(80％ ‑100％)和几乎所有正常胰腺组 织中MSLN表达呈阴性(参见： Baruch,A.C.et  al.Immunocytochemical  study of the  expression  of mesothelin  in fine‑needle aspirationbiopsy  specimens  of  pancreatic  adenocarcinoma.Diagnostic  cytopathology  35,143‑147,doi:10.1002/ dc.20594(2007).； Ibrahim,D.A.&Abouhashem,N.S.Diagnostic  value ofIMP3 and  mesothelin  in differentiating  pancreatic  ductal adenocarcinoma  from chronic  pancreatitis.Pathology,research  and practice  212,288 ‑293,doi:10.1016/ j.prp.2016.01.007(2016).)。 上皮恶性胸膜间皮瘤(Epithelial  malignant肋膜间皮瘤， MPM)普遍表达间皮素， 而肉瘤样胸膜间皮瘤不表达间皮素， 大多数浆液性上皮性卵巢癌和 相关的原发性腹膜癌表达间皮素。 [0004]MSLN也存在于部分正常组织中， 使用由Pastan小组开发的小鼠抗人间皮素抗体 K1， 在腹膜、 胸膜和心包腔的间皮细胞中已经证实了强烈的K1反应性， 但 其水平低于在 恶性 组织中达到的水平(参见： Chan g K,Pai L H,Batra J K,et al.Characterization  ofthe  antigen(CAK1)recognized  by monoclonal  antibody  K1 present on ovarian cancers  and normal mesothelium.[J].Cancer  Research,1992,52(1):181 ‑186.)； 在输卵管上皮、说　明　书 1/14 页 3 CN 11427