(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202180006305.1 (22)申请日 2021.12.23 (85)PCT国际申请进入国家阶段日 2022.05.07 (86)PCT国际申请的申请数据 PCT/CN2021/140871 2021.12.23 (71)申请人 青岛华赛伯曼医学细胞生物有限公 司 地址 266200 山东省青岛市 即墨区鳌山 卫 青岛蓝色硅 谷海科创业中心D楼808室 (72)发明人 李文静　李斌　高青　 (74)专利代理 机构 北京信诺创成知识产权代理 有限公司 1 1728 专利代理师 郝文婷　陈悦军(51)Int.Cl. C07K 14/74(2006.01) C07K 14/47(2006.01) G01N 33/543(2006.01) G01N 33/569(2006.01) C12N 5/0783(2010.01) C12N 5/078(2010.01) A61K 39/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种肿瘤抗原/MHC-I复合物及其制备方法 和用途 (57)摘要 本发明涉及一种肿瘤抗原/MHC ‑I复合物及 其制备方法和用途。 本发明基于鸟枪法的设计原 理， 从肿瘤细胞裂解物中一次性无差别抓取肿瘤 细胞表达的肿瘤抗原与MHC ‑I的复合物， 无需预 先对免疫原性肿瘤抗原进行鉴定， 适用范围更 广， 步骤更加简便， 成本也更低。 本发明提供的肿 瘤抗原/MHC ‑I复合物可以特异性富集肿瘤浸润 淋巴细胞中的CD8+T细胞， 并能够诱导刺激肿瘤 浸润淋巴细胞及其中的CD8+T细胞的活化和增 殖， 解决了肿瘤抗原特异性T细胞的 “精准靶向 ” 问题， 增强肿瘤浸润淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤 功能， 可用于对肿瘤疾病的治疗以及ACT方法的 优化。 权利要求书2页 说明书12页 附图4页 CN 114729029 A 2022.07.08 CN 114729029 A 1.肿瘤抗原/ MHC‑I复合物的制备 方法， 其特 征在于， 所述制备 方法包括： 对肿瘤细胞进行裂解， 得到肿瘤细胞裂解物， 所述肿瘤细胞裂解物含有肿瘤抗原/MHC ‑ I复合物； 将负载有抗体的载体与所述肿瘤细胞裂解物混合处理， 得到所述肿瘤抗原/MHC ‑I复合 物； 其中， 所述肿瘤抗原/MHC ‑I复合物负载于所述载体上， 所述抗体与所述肿瘤抗原/MHC ‑I 复合物中的M HC‑I特异性结合。 2.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述制备方法还包括从负载有所述肿 瘤抗原/MHC‑I复合物的载体中分离所述肿瘤抗原/ MHC‑I复合物的步骤。 3.根据权利要求1或2所述的制备方法， 其特征在于， 以细胞裂解液对所述肿瘤细胞进 行裂解； 优选地， 所述细胞裂解液包括3 ‑[3‑(胆酰胺丙基)二甲氨基 ]丙磺酸内盐、 Tr is缓冲 液和NaCl。 4.根据权利要求1 ‑3任一项所述的制备方法， 其特征在于， 所述抗体为MHC ‑Iβ链抗体； 优选地， 所述 抗体标记有第一标记 物， 所述第一标记 物选自生物素和/或第一 化学偶联物。 5.根据权利要求1 ‑4任一项所述的制备方法， 其特征在于， 所述载体为磁珠和/或量子 点荧光微球； 优选地， 所述载体标记有第二标记物， 所述第二标记物选自亲和素和/或第二 化学偶联物。 6.一种肿瘤抗原/MHC ‑I复合物， 其特征在于， 通过权利 要求1‑5任一项所述制备方法制 备得到。 7.权利要求6所述肿瘤抗原/MHC ‑I复合物在体外富集肿瘤抗原特异性CD8+T细胞、 刺激 相同来源肿瘤浸润淋巴细胞的活化、 增殖和/或制备治疗肿瘤的药物中的用途。 8.一种体外富 集肿瘤抗原特异性CD 8+T细胞的方法， 其特 征在于， 所述方法包括： 将权利要求6所述肿瘤抗原/MHC ‑I复合物与相同来源的肿瘤浸润淋巴细胞接触， 所述 肿瘤浸润淋巴细胞中的肿瘤抗原特异性CD8+T细胞与所述肿瘤抗原/MHC ‑I复合物结合， 得 到结合物， 所述结合物富 集有所述肿瘤抗原特异性CD 8+T细胞。 9.根据权利 要求8所述的方法， 其特征在于， 所述肿瘤抗原/MHC ‑I复合物与标记有生物 素的抗体结合并共同负载于标记有亲和素的载体上， 并且， 在所述肿 瘤抗原/MHC ‑I复合物 与相同来源的肿瘤浸润淋巴细胞接触之前， 所述肿瘤浸润淋巴细胞中添加有亲和素。 10.根据权利 要求8或9所述的方法， 其特征在于， 在所述肿瘤抗原/MHC ‑I复合物与相同 来源的肿瘤浸润淋巴细胞接触之前， 所述肿瘤浸润淋巴细胞中还添加有酪氨酸激酶抑制 剂； 优选地， 所述酪氨酸激酶抑制剂为达 沙替尼。 11.根据权利要求8 ‑10任一项所述的方法， 其特征在于， 所述方法还包括从所述结合物 中分离所述肿瘤抗原特异性CD 8+T细胞的步骤。 12.一种肿瘤抗原特异性CD8+T细胞， 其特征在于， 通过权利要 求8‑11任一项所述方法制 备得到。 13.一种体外刺激相同来源肿瘤浸润淋巴细胞的活化、 增殖的方法， 其特征在于， 所述 方法包括： 将权利要求6所述肿瘤抗原/ MHC‑I复合物与相同来源的肿瘤浸润淋巴细胞接触。 14.根据权利要求13所述的方法， 其特征在于， 将权利要求6所述肿瘤抗原/MHC ‑I复合 物与相同来源的肿瘤 浸润淋巴细胞接触的步骤中， 还添加有细胞 因子； 优选地， 所述细胞 因权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114729029 A 2子选自4‑1BB、 IL‑2、 IL‑21中的至少一种。 15.一种活化的肿瘤浸润淋巴细胞， 其特征在于， 通过权利要求13或14所述方法制备得 到。 16.一种药物组合物， 其特征在于， 所述药物组合物包括有 效成分和药学上可接受的载 体， 所述有效成分包括权利要求12所述肿瘤 抗原特异性CD8+T细胞和/或权利要求15所述活 化的肿瘤浸润淋巴细胞。 17.一种肿瘤的治疗方法， 其特 征在于， 所述方法包括： 将有效量的权利要 求12所述肿瘤抗原特异性CD8+T细胞、 权利要求15 所述活化的肿瘤浸 润淋巴细胞和/或权利要求 16所述药物组合物与所述肿瘤接触； 其中， 所述肿瘤抗原特异 性 CD8+T细胞、 所述活化的肿瘤浸润淋巴细胞以及所述药物组合物中的有效成分来源于所述 肿瘤。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114729029 A 3