(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111634132.6 (22)申请日 2021.12.2 9 (71)申请人 中国医学 科学院输血研究所 地址 610000 四川省成 都市成华区华彩 路 26号 (72)发明人 曹晔　徐莹璨　钟锐　王红　 刘嘉馨　 (74)专利代理 机构 成都高远知识产权代理事务 所(普通合伙) 51222 代理人 魏静　张娟 (51)Int.Cl. A61K 31/337(2006.01) A61K 47/46(2006.01) A61K 47/28(2006.01) A61K 47/24(2006.01)A61K 9/127(2006.01) A61P 35/00(2006.01) B82Y 5/00(2011.01) B82Y 40/00(2011.01) (54)发明名称 一种肿瘤靶向性的复合纳米药物及其制备 方法和用途 (57)摘要 本发明提供了一种肿瘤靶向性的复合纳米 药物及其制备方法和用途， 属于制药领域。 该复 合纳米药物是以肿瘤细胞来源的外泌体、 紫杉 醇、 磷脂和胆固醇为原料制得的， 其中， 磷脂和肿 瘤细胞来源的外泌体的质量比为100： (0.1～ 2.5)。 该复合纳米药物的粒径均匀， 多分散指数 低。 该复合纳米药物同时拥有脂质体和外泌体的 优势， 不仅具有高紫杉醇负载量， 还具有优异的 肿瘤靶向性和低免疫原性， 对同源性肿瘤具有优 异的抑制效果， 应用前景广阔。 本发明制备复合 纳米药物的方法避免了高压条件， 合成条件温 和， 同时还降低了外泌体的使用量， 节约了成本， 适合扩大化 生产。 权利要求书1页 说明书6页 附图2页 CN 114306316 A 2022.04.12 CN 114306316 A 1.一种复合纳米药物， 其特征在于， 它是以肿瘤细胞来源的外泌体、 紫杉醇、 磷脂和胆 固醇为原料制得的， 其中， 磷脂和肿瘤 细胞来源的外泌体的质量比为10 0： (0.1～ 2.5)。 2.根据权利要求1所述的复合纳米药物， 其特征在于， 所述磷脂和肿瘤细胞来源的外泌 体的质量比为10 0： (1～2)， 优选为10 0： 2。 3.根据权利要求1～2任一项所述的复合纳米药物， 其特征在于， 所述紫杉醇、 磷脂、 胆 固醇的质量比为 4： (100～140)： (5～ 20)； 所述磷脂为蛋黄卵磷脂、 二棕榈酰磷脂酰胆碱、 二油酰基卵磷脂、 二油酰磷脂酰乙醇胺 中的一种或两种以上的混合。 4.根据权利要求3所述的复合纳米药物， 其特征在于， 所述紫杉醇、 磷脂、 胆固醇的质量 比为4： 120： 10； 所述磷脂为蛋黄卵磷脂 。 5.根据权利要求1～2任一项所述的复合纳米药物， 其特征在于， 所述肿瘤细胞来源的 外泌体是按照以下方法制得的： 将肿瘤细胞用无外泌体胎牛血清培养基培养后， 收集培养 上清， 先用切向流超滤法浓 缩上清， 然后用超速 离心法富 集外泌体， 即得。 6.根据权利要求1～5任一项所述的复合纳米药物， 其特征在于， 所述肿瘤细胞为肺癌 细胞。 7.根据权利要求1～6任一项所述的复合纳米药物， 其特征在于， 所述复合纳米药物的 粒径为10 0‑200nm， 多分散指数< 0.15， 紫杉醇包封率 为88％以上。 8.一种制备权利要求1～7任一项所述复合纳米药物的方法， 其特征在于， 所述方法包 括以下步骤： (1)将紫杉醇、 磷脂和胆固醇溶解于有机溶剂， 成膜得到薄膜； (2)在薄膜中加入肿瘤 细胞来源的外泌体的溶 液， 水化形成多层囊泡结构脂质体； (3)将多层囊泡结构脂质体通过微射流均质机、 高压挤出机或者高压匀质机， 得到复合 纳米药物。 9.根据权利要求8所述的方法， 其特征在于， 步骤(1)中， 所述有机溶剂为乙醇、 三氯甲 烷中的一种或两种； 所述紫杉 醇与有机溶剂的质量体积比为4： (3～5)mg/mL； 所述 成膜的方 法为薄膜法； 步骤(2)中， 所述肿瘤细胞来源的外泌体的溶液由肿瘤细胞来源的外泌体与水或缓冲 液组成； 所述水化是在搅拌和/或超声下进行的。 10.权利要求1～7任一项所述的复合纳米药物在制备抗肿瘤药物中的用途， 所述肿瘤 优选为肺癌。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114306316 A 2一种肿瘤靶向性的 复合纳米药物及其制备方 法和用途 技术领域 [0001]本发明属于制药领域， 具体涉及一种肿瘤靶向性的复合纳 米药物及其制备方法和 用途。 背景技术 [0002]脂质体是由磷脂双分子层和胆固醇组成的类似细胞膜的一种封闭性囊泡， 具有安 全性、 大小可控性和 易于功能化等优点， 早在上个世纪末就被作为一种理想的药物递送载 体。 但是传统的脂质体进入人体血液循环后易被血浆蛋白粘附， 激发单核巨噬细胞系统对 其的吞噬作用； 此外， 由于其倾向富集于肝、 脾等网状内皮系统(Reticuloendothelial   system,RES)丰富的组织， 加速了脂质体在血液中的清除。 南 京绿叶思 科药业公司生产的紫 杉醇脂质体(英文名称： PTX ‑liposome， 商品名： 力扑素)是我国第一个批准上市的脂质体化 疗药物制剂， 它将疏水性化疗药紫杉醇(Paclitaxel， PTX)包封在了磷脂双分子层中。 虽然 力扑素已经广泛应用于临床恶性肿瘤的治疗， 但 其半衰期短以及缺乏靶向性的问题依然存 在， 传统脂质体的半衰期通常在10小时左右， 肿瘤患者需要加大紫杉醇脂质体的使用频率 才能达到抑制肿瘤生长的效果。 此外， 使用传统PTX ‑liposome化疗伴随着众多副作用， 如出 现骨髓抑制、 神经毒性、 也血管毒性、 肝脏毒性等一系列严重的不良反应， 使肿瘤治疗效果 大打折扣。 以上问题使脂质体作为化疗药物载体的应用受到了一定限制， 因此如何提高紫 杉醇脂质体的疗效 并减少其副作用是 该领域的研究热点之一。 [0003]克服传统紫杉醇脂质体局限性的方法之一是对脂质体进行配体靶向修饰， 即应用 特异性配体与脂质体表面偶联， 选择性地将紫杉醇脂质体递送到所需的作用位点(如肿瘤 组织)。 所使用的特异 性配体通常是肽、 碳水化合物、 糖蛋白或受体配体等分子， 这些分子可 以选择性地识别并结合肿瘤细胞表达的目标抗原， 增加紫杉醇脂质体的靶向性以及药物递 送量。 但是， 功能基团的直接引入往往使制备过程复杂化， 而且通常会降低脂质体对PTX的 包封率。 这可能是 因为修饰过程中涉及的化学反应、 纯化等步骤导致PT X的释放。 此外， 有文 献报道， 脂质体表面修饰的功能基团不能超过10个， 否则容易导致免疫清除等问题。 更为重 要的是， 功能基团对于人体来说都是免疫原性极强的外来物质， 进入循环系统后极易激活 机体免疫系统， 不仅会引起巨噬细胞的吞噬加速其清除， 甚至会引起严重的过敏反应， 危及 患者生命， 因此目前这种方法都还停留在实验室阶段。 [0004]外泌体(Exosome， 简称exo)是一种细胞主动分泌的纳米级小囊泡， 直径为30～ 150nm。 最初， 这种复杂的小囊泡结构在网织红细胞成熟过程中被发现， 随后研究人员又陆 续发现树突细胞、 成纤维细胞、 淋巴细胞、 内皮细胞和肿瘤细胞等不同种类的细胞都可释放 出外泌体。 外泌体并不是简单的细胞脱落碎片， 它能运载细胞内源性蛋白质、 核酸等生物信 息分子， 通过辨认、 黏附、 融合靶细胞将携带的信息物质传递给靶细胞， 进而影响靶细胞生 物代谢。 外泌体作为内源性的纳米尺寸囊泡， 其具有免疫原型和毒性较低的优点。 [0005]文献(Macrophage ‑derived exosome ‑mimetic hybrid vesicles  for tumor  targeted  drug delivery,Acta  Biomateriali a 94(2019)482 –494)报道了一种制备抗肿说　明　书 1/6 页 3 CN 114306316 A 3