(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111640307.4 (22)申请日 2021.12.3 0 (71)申请人 山东源科生物科技股份有限公司 地址 277020 山东省枣庄市高新区复元三 路3168号 (72)发明人 孙波　 (74)专利代理 机构 济南格源知识产权代理有限 公司 373 06 代理人 张蕾 (51)Int.Cl. A61K 38/48(2006.01) A61K 9/127(2006.01) A61P 39/06(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 29/00(2006.01)A61P 7/02(2006.01) A61P 3/10(2006.01) A61P 3/04(2006.01) A61P 27/02(2006.01) A61K 31/7048(2006.01) (54)发明名称 一种脂质体包裹蛋白酶的生产工艺 (57)摘要 本发明属于蛋白酶技术领域， 尤其涉及一种 脂质体包裹蛋白酶的生产工艺， 包括以下工艺步 骤： 将膜材溶于有机溶剂中， 经减压蒸发去除有 机溶剂， 形成脂质薄膜； 将蛋白酶溶解在溶剂中 得到蛋白酶溶液； 向脂质薄膜中加入蛋白酶溶 液， 溶解脂质薄膜， 冰浴超声， 得到脂质体 ‑蛋白 酶溶液； 用微孔滤膜过滤， 得到包裹蛋白酶的脂 质体。 本发明利用脂质体包裹蛋白酶， 将蛋白酶 与外界环境隔开， 保护其不受环境条件影响， 防 止其氧化变质， 延长其活性时间， 增加了蛋白酶 的稳定性， 且脂质体可通过胞吞或膜融合等方式 将蛋白酶转入细胞内， 能有效解决其作为生物大 分子难以透过细胞膜的难题， 可大大提高其作用 效果和利用率。 权利要求书1页 说明书5页 CN 114209819 A 2022.03.22 CN 114209819 A 1.一种脂质体包裹蛋白酶的生产工艺， 其特 征在于， 包括以下工艺 步骤： （1） 将膜材 溶于有机溶剂中， 经减压蒸发去除有机溶剂， 形成脂质薄膜； （2） 将蛋白酶溶解在溶剂中得到蛋白酶溶 液； （3） 向脂质 薄膜中加入蛋白酶溶液， 溶解脂质 薄膜， 冰浴超声， 得到脂质体 ‑蛋白酶溶 液； （4） 用微 孔滤膜过 滤， 得到包裹蛋白酶的脂质体。 2.根据权利要求1所述的脂质体包裹蛋白酶的生产工艺， 其特征在于， 步骤 （1） 中， 所述 膜材包括胆固醇和卵磷脂， 所述胆固醇和卵磷脂的重量比为1∶2 ～1∶ 6。 3.根据权利要求1所述的脂质体包裹蛋白酶的生产工艺， 其特征在于， 步骤 （1） 中， 所述 的有机溶剂中膜材浓度为 4.0～5.5mg/mL； 所述减压蒸发的温度为5 0～70℃。 4.根据权利要求3所述的脂质体包裹蛋白酶的生产工艺， 其特征在于， 步骤 （1） 中， 所述 有机溶剂包括无 水乙醇、 无 水乙醚、 乙醇和氯仿中的一种或多种的组合。 5.根据权利要求1所述的脂质体包裹蛋白酶的生产工艺， 其特征在于， 步骤 （2） 中， 所述 溶剂为磷酸盐缓冲溶 液， PH值为6.0～7.0 。 6.根据权利要求5所述的脂质体包裹蛋白酶的生产工艺， 其特征在于， 步骤 （2） 中， 所述 蛋白酶溶 液中蛋白酶的浓度为0.5～1.5mg/ml。 7.根据权利要求1所述的脂质体包裹蛋白酶的生产工艺， 其特征在于， 步骤 （4） 中， 所述 脂质体的直径为5 0～200nm。 8.根据权利要求1所述的脂质体包裹蛋白酶的生产工艺， 其特征在于， 步骤 （4） 中， 得到 包裹蛋白酶的脂质体后， 再用花色苷进行包覆， 得到花色苷包覆的蛋白酶脂质体。 9.根据权利要求8所述的脂质体包裹蛋白酶的生产工艺， 其特征在于， 在花色苷包覆的 蛋白酶脂质体外再进行脂质体包覆， 最终得到脂质体 ‑花色苷‑脂质体‑蛋白酶的四层包覆 结构的脂质体。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114209819 A 2一种脂质体包裹蛋白酶的生产工艺 技术领域 [0001]本发明属于蛋白酶技 术领域， 尤其涉及一种脂质体包裹蛋白酶的生产工艺。 背景技术 [0002]蛋白酶是生物体内的一类酵素， 是水解蛋白质肽键 的一类酶的总称， 它们能够有 效分解蛋白质， 分解方法是打断那些将氨基酸连结成多肽链的肽键。 按其水解多肽的方式， 可以将其分为内肽酶和外肽酶两类。 内肽酶将 蛋白质分子内部切断， 形成分子量较小的月 示和胨。 外肽酶从 蛋白质分子的游离氨基或羧基的末端逐个将肽键水解， 而游离出氨基酸， 前者为氨基肽酶后者为羧基肽酶。 按其活性中心和最适pH值， 又可将 蛋白酶分为丝氨酸蛋 白酶、 巯基蛋白酶、 金属蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶。 按其反应的最适pH值， 分为酸性蛋白酶、 中性蛋白酶和碱性蛋白酶。 工业生产上应用的蛋白酶， 主要 是内肽酶。 蛋白酶广泛存在于动 物内脏、 植物茎叶、 果实和微生物中。 微生物蛋白酶， 主要由霉菌、 细菌， 其次由酵母、 放线菌 生产。 [0003]由于蛋白酶对环境条件敏感， 容易氧化变质， 造成应用上的缺陷。 脂质体是由磷脂 双分子层形成的内部包含水相的封闭囊泡， 具有缓释性、 细胞亲和性、 组织相容性等优点， 已成功应用于医药、 化工、 化妆品等领域中。 因此， 研究出一种脂质体包裹蛋白酶的生产工 艺， 以提高 蛋白酶的稳定性和生物利用性， 是本领域 技术人员亟 待解决的技 术问题。 发明内容 [0004]为解决上述现有技术中存在的问题， 本发明提供了一种脂质体包裹蛋白酶的生产 工艺。 [0005]为实现上述目的， 本发明采用如下技 术方案： 一种脂质体包裹蛋白酶的生产工艺， 包括以下工艺 步骤： （1） 将膜材 溶于有机溶剂中， 经减压蒸发去除有机溶剂， 形成脂质薄膜； （2） 将蛋白酶溶解在溶剂中得到蛋白酶溶 液； （3） 向脂质薄膜中加入蛋白酶溶液， 溶解脂质薄膜， 冰浴超声， 得到脂质体 ‑蛋白酶 溶液； （4） 用微 孔滤膜过 滤， 得到包裹蛋白酶的脂质体。 [0006]优选的， 步骤 （1） 中， 所述膜材包括胆固醇和卵磷脂， 所述胆固醇和卵磷脂的重量 比为1∶2～1∶ 6。 [0007]优选的， 步骤 （1） 中， 所述的有机溶剂中膜 材浓度为4.0～5.5m g/mL； 所述减压蒸发 的温度为5 0～70℃。 [0008]优选的， 步骤 （1） 中， 所述有机溶剂包括无水乙醇、 无水乙醚、 乙醇和氯仿中的一种 或多种的组合。 [0009]优选的， 步骤 （2） 中， 所述溶剂为磷酸盐缓冲溶 液， PH值为6.0～7.0 。 [0010]优选的， 步骤 （2） 中， 所述蛋白酶溶 液中蛋白酶的浓度为0.5～1.5mg/ml。说　明　书 1/5 页 3 CN 114209819 A 3