(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111638473.0 (22)申请日 2021.12.2 9 (71)申请人 南京中医药大学 地址 210023 江苏省南京市栖霞区仙林大 道138号 (72)发明人 赵明　段金廒　杨承斌　周俊飞　 陶伟伟　卢斯枬　 (74)专利代理 机构 南京经纬专利商标代理有限 公司 32200 代理人 陆志斌 (51)Int.Cl. C07D 493/10(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 具有抗肿瘤活性苦木素类化合物及其制备 方法与应用 (57)摘要 本发明涉及一种从鸦胆子中分离得到的具 有抗肿瘤活性苦木素类化合物及其制备方法。 本 发明将鸦胆子干燥成熟果实的80％乙醇提取物 经大孔树脂脱色素， 再由正向硅胶柱、 MCI柱、 聚 酰胺柱划段， 最后经过凝胶和高效液相HPLC分离 纯化得到二个新的化合物， 并采用MTT法测试新 化合物对Mia  PaCa‑2胰腺癌细胞的IC50(半数抑 制浓度)， 表明化合物具有良好的抗胰腺癌作用， 可作为抗胰腺癌药物开发的先导 化合物。 权利要求书3页 说明书9页 附图3页 CN 114409670 A 2022.04.29 CN 114409670 A 1.一种具有抗肿瘤活性的苦 木素类化 合物， 其特 征在于， 结构式如下： 2.权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的苦木素类化合物的制备方法， 其特征在于包括 以下步骤： 步骤1： 将干燥鸦胆子果实粉碎， 加入8～ 16倍量体积乙醇溶液， 搅匀， 反复回流提取， 过 滤， 合并滤 液， 减压回收乙醇并挥至无醇味得浸膏； 步骤2： 将浸膏用适量的蒸馏水混旋， 依次用石油醚、 乙酸乙酯、 正丁醇进行萃取， 分别 得到石油醚部位、 乙酸乙酯部位、 正 丁醇部位和水部位； 步骤3： 取步骤2的乙酸乙酯部位进行预处理过的大孔树脂吸附， 并用30～80％乙醇洗 脱， 收集合并洗脱液， 减压回收乙醇， 备用； 步骤4： 取步骤3洗脱液， 经正相硅胶柱色谱分离， 依次用石油 醚‑乙酸乙酯， 二氯甲烷 ‑ 甲醇梯度洗脱， 通过薄层色谱检测， 合并相似成分进行， 得到 6个组分Fr.1～Fr.6； 步骤5： 取步骤4的Fr.6组分经聚酰胺 柱色谱， 甲醇 ‑水等度洗脱， 组分记为Fr.6 ‑1； 步骤6： 取步骤4的组分Fr.6 ‑1经MCI中压制 备色谱分离纯化， 采用甲醇 ‑水体系梯度洗 脱， 每个浓度梯度洗脱， 薄层色谱检测合并相同流分， 得到4个组分Fr.6 ‑1‑1～Fr.6‑1‑4； 将 组分Fr.6 ‑1‑1经C18中压制备 色谱分离纯化， 采用甲醇 ‑水体系梯度洗脱， 薄层色谱检测合并 相同流分， 得到5个组分Fr.6 ‑1‑1‑1～Fr.6‑1‑1‑5； 最后将组分Fr.6 ‑1‑1‑4通过C18高压制备 色谱反复洗脱得化 合物1； 步骤7： 取步骤2的正丁醇部位进行预处理过的大孔树脂吸附， 并用乙醇 ‑水梯度洗脱， 薄层色谱检测合并相同流分， 得到 3个组分Fr.ZDC ‑1～Fr.ZDC ‑3； 步骤8： 取步骤7的组分Fr.ZDC ‑2， 经正相硅胶柱色谱分离， 依次用石油醚 ‑乙酸乙酯， 甲 醇梯度洗脱， 通过薄层色谱检测， 合并相似成分进行， 得到3个组分Fr.ZDC ‑2‑1～Fr.ZDC ‑2‑ 3； 步骤9： 取步骤8的组分Fr.ZDC ‑2‑3经聚酰胺柱色谱， 甲醇 ‑水等度洗脱， 组分记为 Fr.ZDC‑2‑3‑1； 步骤10： 取步骤9的组分Fr.ZDC ‑2‑3‑1经MCI中压制备色谱分离纯化， 采用甲醇 ‑水体系 梯度洗脱， 薄层色谱检测合并相同流分， 得到3个组分Fr.ZDC ‑2‑3‑1‑1～Fr.ZDC ‑2‑3‑1‑3； 将组分Fr.ZDC ‑2‑3‑1‑1经C18中压制备色谱分离纯化， 采用甲醇 ‑水体系梯度洗脱， 薄层色谱 检测合并相同流分， 得到4个组分Fr.ZDC ‑2‑3‑1‑1‑1～Fr.ZDC ‑2‑3‑1‑1‑4； 最后将组分 Fr.ZDC‑2‑3‑1‑1‑2通过C18高压制备色谱反复洗脱得化 合物2。 3.根据权利要求2所述的具有抗肿瘤活性的苦木素类化合物的制备方法， 其特征在于， 包括以下步骤： 步骤1： 将干燥鸦胆子果实粉碎， 加入8～10倍量体积60～80％乙醇， 搅匀， 反复回流提 取1～3次， 每次1～3 h， 过滤， 合并滤 液， 减压回收乙醇并挥至无醇味得浸膏；权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 114409670 A 2步骤2： 将浸膏用适量的蒸馏水混旋， 依次用石油醚、 乙酸乙酯、 正丁醇进行萃取， 分别 得到石油醚部位、 乙酸乙酯部位、 正 丁醇部位和水部位； 步骤3： 取步骤2的乙酸乙酯部位进行预处理过的大孔树脂吸附， 并用80％乙醇洗脱， 收 集合并洗脱液， 减压回收乙醇， 备用； 步骤4： 取步骤3洗脱液， 经正相硅胶柱色谱分离， 依次用体积比为85:15， 75:25， 55:45， 35:65的石油醚 ‑乙酸乙酯依次洗脱， 然后再用体积比95:5和0:100的二氯甲烷 ‑甲醇梯度洗 脱， 通过薄层色谱检测， 10％硫酸 ‑乙醇显色观察成分相 似情况， 相 似成分进行合并， 得到6 个组分Fr.1～Fr.6； 步骤5： 取步骤4的Fr.6， 即二 氯甲烷‑甲醇0:100洗脱组分， 经聚酰胺柱色谱， 30％甲醇 ‑ 水等度洗脱， 组分记为Fr.6 ‑1； 步骤6： 取步骤4的组分Fr.6 ‑1经MCI中压制 备色谱分离纯化， 采用甲醇 ‑水体系梯度洗 脱， 每个浓度梯度洗脱4～5个柱体积， 薄层色谱检测合并相同流分， 得到4个组分Fr.6 ‑1‑1 ～Fr.6‑1‑4； 将组分Fr.6 ‑1‑1经C18中压制备色谱分离纯化， 采用甲醇 ‑水体系梯度洗脱， 每 个浓度梯度洗脱4～5个柱体积， 薄层色谱检测合并相同流分， 得到5个组分Fr.6 ‑1‑1‑1～ Fr.6‑1‑1‑5， 最后将组分Fr.6 ‑1‑1‑4通过C18高压制备色谱反复洗脱得化 合物1； 步骤7： 取步骤2的正丁醇部位进行预处理过的大孔树脂吸附， 并用乙醇 ‑水梯度洗脱， 每个浓度梯度洗脱4～5个柱体积， 薄层色谱检测合并相同流分， 得到3个组分Fr.ZDC ‑1～ Fr.ZDC‑3； 步骤8： 取步骤7的组分Fr.ZDC ‑2， 经正相硅胶柱色谱分离， 依次用体积比为70:30和50: 50的石油醚 ‑乙酸乙酯， 甲醇梯度洗脱， 通过薄层色谱检测， 10％硫酸 ‑乙醇显色观 察成分相 似情况， 相似成分进行合并， 得到 3个组分Fr.ZDC ‑2‑1～Fr.ZDC ‑2‑3； 步骤9： 取步骤8的甲醇洗脱组分Fr.ZDC ‑2‑3， 经聚酰胺柱色谱， 30％甲醇 ‑水等度洗脱， 组分记为Fr.ZDC ‑2‑3‑1； 步骤10： 取步骤9的组分Fr.ZDC ‑2‑3‑1经MCI中压制备色谱分离纯化， 采用甲醇 ‑水体系 梯度洗脱， 每个浓度梯度洗脱4～5个柱体积， 薄层色谱检测合并相同流分， 得到3个组分 Fr.ZDC‑2‑3‑1‑1～Fr.ZDC ‑2‑3‑1‑3； 将组分Fr.ZDC ‑2‑3‑1‑1经C18中压制备色谱分离纯化， 采用甲醇 ‑水体系梯度洗脱， 每个浓度梯度洗脱4～5个柱体积， 薄层色谱检测合并相同流 分， 得到4个组分Fr.ZDC ‑2‑3‑1‑1‑1～Fr.ZDC ‑2‑3‑1‑1‑4； 最后将组分Fr.ZDC ‑2‑3‑1‑1‑2通 过C18高压制备色谱反复洗脱得化 合物2。 4.根据权利要求2或3所述的具有抗肿瘤活性的苦木素类化合物的制备方法， 其特征在 于， 步骤6和步骤10所述 的C18高压制备色谱的具体条件为： 日本岛津LC ‑20AR， SPD ‑20A紫 外可见光检测器， 检测波长254nm， XBridge  BEH C18 OBDTM Prep Column, 3.5μm, 10mm×250mm,1/pkg， 洗脱剂为 40％甲醇 ‑水。 5.权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的苦木素类化合物在制备抗癌症的药物中的应 用。 6.根据权利要求5所述的应用， 其特 征在于， 所述的癌症包括胰腺癌。 7.根据权利要求5所述的应用， 其特征在于， 将苦木素类化合物与药学上可接受 的载体 制备成口服制剂或外用制剂。权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 114409670 A 3