(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111384353.2 (22)申请日 2021.12.2 9 (71)申请人 深圳湾实验室坪 山生物医药研发转 化中心 地址 518118 广东省深圳市坪 山区坑梓街 道兰景路16号国富文化厂区 申请人 北京大学深圳研究生院 (72)发明人 李子刚　尹丰　张亚萍　姜乐盈　 刘招弟　 (74)专利代理 机构 上海政济知识产权代理事务 所(普通合伙) 31479 专利代理师 辇甲武 (51)Int.Cl. A61K 39/00(2006.01) A61K 39/385(2006.01)A61K 39/39(2006.01) A61K 47/54(2017.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 基于DNA折纸的肿瘤新抗原递送系统及其制 备方法和应用 (57)摘要 本发明提供了一种基于DNA折纸的肿瘤新抗 原递送系统的制备方法， 选择8条单链DNA， 其中 三条单链的5 ’端延伸出20nt的ployT结构， 用于 与含有锍盐中心的肿瘤新抗原肽 ‑核酸可逆共价 偶联分子配对， 实现OVA抗原与DNA折纸的组装； 另外选择三条单链DNA， 在其5 ’端延伸出一段CpG 序列， 作为免疫激活辅助因子协同免疫系统激 活； 将上述用于制备DNA折纸的单链DNA和上述新 抗原肽‑核酸可逆共价偶联分子混合； 经过高温 变性， 退火杂交， 形成三角锥 状的DNA四面体纳米 复合物， 即为基于DNA折纸的肿瘤新抗原递送系 统。 实验证明本发明构建的含有锍盐中心的DNA 折纸递送系统显著抑制了肿瘤的生长和肿瘤细 胞的肺转移。 权利要求书2页 说明书9页 序列表3页 附图6页 CN 114588254 A 2022.06.07 CN 114588254 A 1.一种基于DNA折 纸的肿瘤新 抗原递送系统的制备 方法， 其特 征在于包括如下步骤： 1)一个设计用于制备DNA折纸的单链DNA的步骤， 在所述的设计用于制备DNA折纸的单 链DNA的步骤中， 设计8条 单链DNA； 第一条单链DNA的5 ’端至3’端的碱基含有两个功能 区； 第二条单链DNA的5 ’端至3’端的碱基含有三个功能 区； 第三条单链DNA的5 ’端至3’端的碱基含有两个功能 区； 第四条单链DNA的5 ’端至3’端的碱基含有两个功能 区； 第五条单链DNA的5 ’端至3’端的碱基含有三个功能 区； 第六条单链DNA的5 ’端至3’端的碱基含有两个功能 区； 第七条单链DNA的5 ’端至3’端的碱基含有两个功能 区； 第八条单链DNA的5 ’端至3’端的碱基含有两个功能 区； 所述的8条 单链DNA各功能 区碱基的配对情况如下： 第二条单链DNA的5 ’端至3’端的第二个功能区碱基与第五条单链DNA的5 ’端至3’端的 第一个功能 区、 第六条单链DNA的5 ’端至3’端的第二个功能 区碱基互补； 第三条单链DNA的5 ’端至3’端的第二个功能区碱基和第一条单链DNA的5 ’端至3’端的 第二个功能 区、 第二条 单链DNA的5 ’端至3’端的第一个功能 区碱基互补； 第四条单链DNA的5 ’端至3’端的第一个功能区碱基和第七条单链DNA的5 ’端至3’端的 第一个功能 区、 第八条 单链DNA的5 ’端至3’端的第二个功能 区碱基互补； 第五条单链DNA的5 ’端至3’端的第二个功能区碱基和第三条单链DNA的5 ’端至3’端的 第一个功能 区、 第四条 单链DNA的5 ’端至3’端的第二个功能 区碱基互补； 第七条单链DNA的5 ’端至3’端的第二个功能区碱基和第一条单链DNA的5 ’端至3’端的 第一个功能 区、 第二条 单链DNA的5 ’端至3’端的第三个功能 区碱基互补； 第八条单链DNA的5 ’端至3’端的第一个功能区碱基和第六条单链DNA的5 ’端至3’端的 第一个功能 区、 第五条 单链DNA的5 ’端至3’端的第三个功能 区碱基互补； 第二条、 第三条、 第七条单链DNA的5 ’端设置有一段CpG的序列， 所述的CpG的序列如SEQ   ID NO.3所示； 第一条、 第五条和第六条单链DNA的5 ’端延伸出20nt的ployT结构， 用于与含 有锍盐中心的新 抗原肽‑核酸可逆 共价偶联分子互补配对， 2)将上述用于制备DNA折纸的第一到第八单链DNA与含有锍盐中心的肿瘤新抗原肽 ‑核 酸可逆共价偶联分子之间分别按照1:1 ‑1.2的摩尔比混合； 3)将步骤1)中的混合物经过高温变性， 退火杂交， 8条ssDNA自组装成三角锥状的DNA四 面体纳米复合物， 所述的DNA四面体每条边长的碱基数为 15‑30bp， 即为基于DNA折纸的肿瘤 新抗原递送系统。 2.根据权利要求1所述的一种基于DNA折纸的肿瘤新抗原递送系统的制备方法， 其特征 在于， 在该四面体结构的六条边上均有一个开口位置， 用于引入三条新抗原肽和三条免疫 佐剂， 保证其分别被固定在DNA折 纸的一条边上， 且朝向互不干扰。 3.根据权利要求1所述的一种基于DNA折纸的肿瘤新抗原递送系统的制备方法， 其特征 在于， 第一到第八单链DNA之间的摩尔比为1： 1： 1： 1： 1： 1： 1： 1。 4.根据权利要求1所述的一种基于DNA折纸的肿瘤新抗原递送系统的制备方法， 其特征 在于， 所述的含有锍盐中心的肿瘤新抗原肽 ‑核酸可逆共价偶联分子的制备方法包括如下权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114588254 A 2步骤： 1)选择一个肿瘤新抗原肽， 在所述的肿瘤新抗原模拟肽的N端引入一个甲硫氨酸， 随后 在该甲硫氨酸 位置引入炔丙基锍盐； 2)选用一条20nt的ployA序列， 在ploy20A的5 ’端进行了C6巯基修饰， 然后 进行预处理， 使其打开因二硫键自聚形成的二聚物； 3)在(NH4)2CO3缓冲液中， 将步骤2)预处理的DNA和步骤1)中带有炔丙基锍盐中心的肿 瘤新抗原肽混合， 制备获得含有锍盐中心的新 抗原肽‑核酸可逆 共价偶联分子 。 5.根据权利要求4所述的一种基于DNA折纸的肿瘤新抗原递送系统的制备方法， 其特征 在于， 所述的肿瘤新抗原模拟肽为OVA 抗原肽， 所述的OVA 抗原肽是鸡卵清蛋白OVA的抗原表 位。 6.权利要求1所述的方法获得的基于DNA折 纸的肿瘤新 抗原递送系统。 7.一种疫苗， 含有权利要求5的方法获得的基于DNA折 纸的肿瘤新 抗原递送系统。 8.权利要求7 所述的疫苗在制备用于肿瘤免疫 治疗的药物中的用途。 9.权利要求7 所述的疫苗在制备用于肿瘤免疫预防的药物中的用途。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114588254 A 3